ທີ່ຢູ່ປະຈຸບັນ†: OX11 0DE, ສະຫະລາຊະອານາຈັກ, ອາຄານ Diamond, ສວນວິທະຍາສາດ ແລະ ນະວັດຕະກໍາ Harwell, Dietcote, Oxfordshire, ສະຫະລາຊະອານາຈັກ, ບໍລິສັດ Diamond Light Source Co., Ltd., ສູນຖ່າຍພາບຊີວະພາບເອເລັກໂຕຣນິກ.
ສະລັບສັບຊ້ອນການເກັບກ່ຽວແສງສູນກາງປະຕິກິລິຍາ 1 (RC-LH1) ແມ່ນອົງປະກອບຫຼັກຂອງການສັງເຄາະແສງຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີແສງສີມ່ວງ. ພວກເຮົາໄດ້ນຳສະເໜີໂຄງສ້າງກ້ອງຈຸລະທັດ cryo-electron ສອງອັນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ຈາກ Rhodopseudomonas palustris. ໂຄງສ້າງຄວາມລະອຽດ 2.65-Å ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W ປະກອບດ້ວຍວົງແຫວນ LH1 ໜ່ວຍຍ່ອຍ 14 ວົງທີ່ອ້ອມຮອບ RC, ເຊິ່ງຖືກຂັດຂວາງໂດຍໂປຣຕີນ W, ໃນຂະນະທີ່ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ບໍ່ມີໂປຣຕີນ-W ແມ່ນອົງປະກອບ RC ຢ່າງສົມບູນທີ່ອ້ອມຮອບດ້ວຍ RC. ວົງແຫວນ LH1 ໜ່ວຍຍ່ອຍ 16 ວົງທີ່ປິດ. ການປຽບທຽບໂຄງສ້າງເຫຼົ່ານີ້ໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈກ່ຽວກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງ quinone ໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1, ລວມທັງການປ່ຽນແປງໂຄງສ້າງທີ່ບໍ່ໄດ້ກຳນົດໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້ເມື່ອຜູກມັດ quinone ຢູ່ບໍລິເວນ RC QB, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບສະຖານທີ່ຂອງບໍລິເວນຜູກມັດ quinone ຊ່ວຍ, ເຊິ່ງຊ່ວຍຖ່າຍທອດພວກມັນໄປຫາ RC. ໂຄງສ້າງທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງໂປຣຕີນ W ປ້ອງກັນການປິດຂອງວົງແຫວນ LH1, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສ້າງຊ່ອງທາງສຳລັບການເລັ່ງການແລກປ່ຽນ quinone/quinolone.
ພະລັງງານທີ່ໄດ້ຈາກການສັງເຄາະແສງສາມາດຄ້ຳຊູຊີວິດເກືອບທັງໝົດໃນໂລກ, ແລະມັນມີທ່າແຮງອັນໃຫຍ່ຫຼວງສຳລັບເຕັກໂນໂລຊີຊີວະພາບແສງຕາເວັນ. ໃນຂະນະທີ່ສົ່ງເສີມການສັງເຄາະແສງທົ່ວໂລກ, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີແສງສີມ່ວງຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບພະລັງງານ ແລະ ຄວາມສາມາດໃນການເຜົາຜານອາຫານທີ່ຫຼາກຫຼາຍ. ພວກມັນສາມາດຫຼີກລ່ຽງການສັງເຄາະແສງ ແລະ ເຕີບໃຫຍ່ເປັນເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີແສງ heterotrophic ໃນຄວາມມືດ, ສາມາດແກ້ໄຂໄນໂຕຣເຈນ ແລະ ຄາບອນໄດອອກໄຊ, ຜະລິດໄຮໂດຣເຈນ, ແລະ ທຳລາຍສານປະກອບອາໂຣມາຕິກ (1-3). ເພື່ອສະໜອງພະລັງງານສຳລັບຂະບວນການເຫຼົ່ານີ້, ແສງຕ້ອງໄດ້ຮັບການປ່ຽນຢ່າງວ່ອງໄວ ແລະ ມີປະສິດທິພາບເປັນພະລັງງານເຄມີ. ຂະບວນການນີ້ເລີ່ມຕົ້ນເມື່ອສະລັບສັບຊ້ອນເສົາອາກາດດັກຈັບແສງດູດຊຶມແສງ ແລະ ໂອນພະລັງງານທີ່ກັກຂັງໄປຫາສູນປະຕິກິລິຍາ (RC), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເລີ່ມຕົ້ນການແຍກປະຈຸ (4 – 7). ໜ່ວຍພື້ນຖານຂອງການສັງເຄາະແສງໃນເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີແສງສີມ່ວງປະກອບດ້ວຍ RC ປະເພດ 2, ລ້ອມຮອບດ້ວຍສະລັບສັບຊ້ອນການເກັບກ່ຽວແສງ 1 (LH1), ເຊິ່ງປະກອບເປັນສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ RC-LH1. LH1 ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໂດຍອາເຣຂອງ heterodimers αβ ໂຄ້ງ, ແຕ່ລະອັນຜູກມັດສອງໂມເລກຸນ chlorophyll ຂອງແບັກທີເຣັຍ (BChl) a ແລະ ໜຶ່ງ ຫຼື ສອງ carotenoids (8-12). ເສົາອາກາດ LH1 ທີ່ງ່າຍທີ່ສຸດປະກອບດ້ວຍ heterodimers αβ 16 ຫຼື 17 ອັນທີ່ອ້ອມຮອບ RC (9-13) ໃນວົງປິດ, ແຕ່ໃນສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກອື່ນໆ, peptides transmembrane ຂັດຂວາງຄວາມຕໍ່ເນື່ອງຂອງ LH1 ອ້ອມຂ້າງ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສົ່ງເສີມການແຜ່ກະຈາຍ quinol/quinone ລະຫວ່າງ RC ແລະສະລັບສັບຊ້ອນ cytochrome bc1 (11, 13-15). ພືດ phototrophic ສີມ່ວງ Rhodopseudomonas (Rps.) ແມ່ນສິ່ງມີຊີວິດແບບຈຳລອງທີ່ສາມາດເຂົ້າໃຈການຖ່າຍໂອນພະລັງງານແລະເອເລັກຕຣອນທີ່ສະໜັບສະໜູນການສັງເຄາະແສງ. ໂຄງສ້າງຜລຶກທຳອິດຂອງ Rps. ຮູບແບບຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ palustris RC-LH1 ແມ່ນ RC, ລ້ອມຮອບດ້ວຍວົງ heterodimeric LH1 15 ອັນ, ເຊິ່ງຖືກຂັດຂວາງໂດຍໂປຣຕີນທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກທີ່ເອີ້ນວ່າ "Protein W" (14). ຕໍ່ມາ Protein-W ໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນ RPA4402, ເຊິ່ງເປັນໂປຣຕີນ 10.5kDa ທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການກຳນົດລັກສະນະທີ່ມີກ້ຽວວຽນ transmembrane (TMH) ສາມອັນທີ່ຄາດຄະເນໄວ້ (16). ພວກເຮົາສະເໜີໃຫ້ປ່ຽນຊື່ gene rpa4402 ທີ່ເຂົ້າລະຫັດ protein W ເປັນ pufW ເພື່ອໃຫ້ສອດຄ່ອງກັບລະບົບການຕັ້ງຊື່ທີ່ໃຊ້ສຳລັບ gene ທີ່ເຂົ້າລະຫັດ RC-L, M (pufL, pufM) ແລະ LH1α, β (pufA, pufB). ໜ້າສົນໃຈ, protein-W ມີຢູ່ໃນປະມານ 10% ຂອງ RC-LH1 ເທົ່ານັ້ນ, ເຊິ່ງເປີດເຜີຍວ່າ Rps. palustris ຜະລິດສອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ໃນທີ່ນີ້, ພວກເຮົາລາຍງານໂຄງສ້າງ cryo-EM (cryo-EM) ຄວາມລະອຽດສູງຂອງສອງສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ, ອັນໜຶ່ງມີໂປຣຕີນ W ແລະ heterodimers αβ 14 ອັນ, ອີກອັນໜຶ່ງບໍ່ມີໂປຣຕີນ W ແລະວົງປິດ Heterodimer LH1 16 ອັນ. ໂຄງສ້າງຂອງພວກເຮົາສະແດງເຖິງການປ່ຽນແປງຂັ້ນຕອນໃນຄວາມເຂົ້າໃຈຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ຂອງ Rps. palustris, ເພາະວ່າພວກເຮົາໄດ້ວິເຄາະປະຊາກອນທີ່ເປັນເອກະພາບຂອງແຕ່ລະຕົວແປ ແລະ ມີຄວາມລະອຽດພຽງພໍທີ່ຈະກຳນົດ peptide ແລະເມັດສີທີ່ຜູກມັດ ແລະ lipids ແລະ quinones ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງຊັດເຈນ. ການປຽບທຽບໂຄງສ້າງເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າໂປຣຕີນ TMH ສາມຊະນິດ -W ທີ່ຍັງບໍ່ທັນພົບໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ອື່ນໆມາຮອດປະຈຸບັນສ້າງຊ່ອງທາງ quinone ເພື່ອເລັ່ງການແລກປ່ຽນ quinone/quinolone. ຈຳນວນສະຖານທີ່ຜູກມັດ lipid ແລະ quinone ທີ່ຖືກອະນຸລັກໄວ້ໄດ້ຖືກລະບຸ, ແລະພວກເຮົາໄດ້ເປີດເຜີຍການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງໃໝ່ຫຼັງຈາກການລວມກັນຂອງ quinone ແລະ RC, ເຊິ່ງອາດຈະເໝາະສົມກັບ photosystem II (PSII) RC ຂອງສິ່ງມີຊີວິດ phototrophic ທີ່ມີອົກຊີເຈນ. ການຄົ້ນພົບຂອງພວກເຮົາໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈໃໝ່ກ່ຽວກັບຈลະວິທະຍາຂອງການຜູກມັດ ແລະ ການແລກປ່ຽນ quinone/quinolone ໃນສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ RC-LH1 ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ phototrophic ສີມ່ວງ.
ເພື່ອຄວາມສະດວກໃນການສຶກສາລາຍລະອຽດຂອງສອງສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ພົບໃນ Rps. palustris, ພວກເຮົາແຍກ RC-LH1 ແຕ່ລະອັນໂດຍວິທີການທາງຊີວະເຄມີ. ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ຂາດໂປຣຕີນ W (ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າ ΔpufW) ໄດ້ຖືກບໍລິສຸດຈາກເຊື້ອທີ່ຂາດ gene pufW (16), ແລະສາມາດຜະລິດສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ໄດ້ພຽງອັນດຽວເທົ່ານັ້ນ. ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ມີໂປຣຕີນ W ແມ່ນຜະລິດໂດຍເຊື້ອ. ໂປຣຕີນ W ຂອງເຊື້ອນີ້ຖືກດັດແປງດ້ວຍປ້າຍ His 10x ຢູ່ທີ່ປາຍ C ຂອງມັນ, ດັ່ງນັ້ນສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ມີໂປຣຕີນ W ສາມາດລວມເຂົ້າກັບໂປຣຕີນ W ທີ່ຂາດສ່ວນໃຫຍ່ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບໂດຍການເຮັດໃຫ້ໂລຫະບໍ່ເຄື່ອນທີ່. ສະລັບສັບຊ້ອນດັ່ງກ່າວຖືກແຍກອອກຢ່າງມີປະສິດທິພາບ (16) Affinity Chromatography (IMAC).
ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1, ທັງສອງສະລັບສັບຊ້ອນປະກອບດ້ວຍ RC ໜ່ວຍຍ່ອຍສາມໜ່ວຍ (RC-L, RC-M ແລະ RC-H) ລ້ອມຮອບດ້ວຍເສົາອາກາດ LH1. ໂຄງສ້າງ 2.80-A ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ຂາດໂປຣຕີນ-W ສະແດງໃຫ້ເຫັນ heterodimers αβ 16 ອັນ, ປະກອບເປັນວົງ LH1 ປິດລ້ອມຮອບ RC ຢ່າງສົມບູນ, ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116. ໂຄງສ້າງ 2.65Å ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ມີໂປຣຕີນ-W ມີ 14-heterodimer LH1 ທີ່ຖືກລົບກວນໂດຍໂປຣຕີນ-W, ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າ RC-LH114-W.
(A ແລະ B) ຕົວແທນພື້ນຜິວຂອງສານປະກອບ. (C ແລະ D) ເມັດສີທີ່ຜູກມັດສະແດງອອກເປັນເສັ້ນ. (E ແລະ F) ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ສັງເກດເຫັນຈາກພື້ນຜິວຂອງໄຊໂຕພລາສຊຶມມີເພບໄທດ໌ ແລະ ໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ທີ່ເປັນຕົວແທນໃນກາຕູນ, ແລະ ຖືກນັບຕາມເຂັມໂມງຈາກຊ່ອງຫວ່າງໂປຣຕີນ-W [ສອດຄ່ອງກັບໝາຍເລກ Rba. ສະລັບສັບຊ້ອນ sphaeroides (13)]. ສຳລັບ LH1-α, ສີຂອງໜ່ວຍຍ່ອຍໂປຣຕີນແມ່ນສີເຫຼືອງ; ສຳລັບ LH1-β, ສີຂອງໜ່ວຍຍ່ອຍໂປຣຕີນແມ່ນສີຟ້າ; ສຳລັບໂປຣຕີນ-W, ໂປຣຕີນແມ່ນສີແດງ; ສຳລັບ RC-H, ມັນແມ່ນສີຟ້າຂຽວ; ສຳລັບ RC-L, ມັນແມ່ນສີສົ້ມ; ສຳລັບ RC-M, ສີມ່ວງແດງ. ໂຄແຟັກເຕີແມ່ນເປັນຕົວແທນໂດຍເສັ້ນ, ສີຂຽວເປັນຕົວແທນໂມເລກຸນ BChl ແລະ BPh a, ສີມ່ວງເປັນຕົວແທນແຄໂຣທີນອຍ, ແລະ ສີເຫຼືອງເປັນຕົວແທນໂມເລກຸນ UQ10. (G ແລະ H) ຮູບຂະຫຍາຍຂອງຊ່ອງຫວ່າງໂປຣຕີນ-W ໃນພື້ນທີ່ທຽບເທົ່າຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W (G) ແລະ ສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 (H). ໂຄຟາກເຕີຖືກສະແດງຢູ່ໃນຮູບແບບຂອງການຕື່ມຊ່ອງຫວ່າງ, ຄີໂນນທີ່ມີທາດ chelated ຖືກສະແດງເປັນສີຟ້າ. ຊ່ອງຫວ່າງໂປຣຕີນ-W ຖືກເນັ້ນດ້ວຍເສັ້ນປະສີຟ້າໃນ (G), ແລະຮູນ້ອຍໆບ່ອນທີ່ quinone/quinolol ແຜ່ກະຈາຍຢູ່ໃນວົງແຫວນ LH116 ຖືກເນັ້ນດ້ວຍເສັ້ນປະສີດຳໃນ (H).
ຮູບທີ 1 (A ແລະ B) ສະແດງໃຫ້ເຫັນ RC ລ້ອມຮອບດ້ວຍອາເຣເປີດ ຫຼື ປິດຂອງ heterodimers LH1αβ, ເຊິ່ງແຕ່ລະອັນຜູກມັດ BChl ສອງອັນ ແລະ carotenoid ໜຶ່ງອັນ (ຮູບທີ 1, C ແລະ D). ການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ Rps ແມ່ນສະລັບສັບຊ້ອນ LH1. ໃນເສັ້ນທາງການສັງເຄາະທາງຊີວະພາບຂອງ spirulina xanthin, ຊະນິດເຫຼົ່ານີ້ມີປະຊາກອນປະສົມຂອງ carotenoids (17). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, spiropyrroxanthin ແມ່ນ carotenoid ທີ່ໂດດເດັ່ນ ແລະ ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງມັນແມ່ນໜ້າພໍໃຈ. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາຈຶ່ງເລືອກທີ່ຈະສ້າງແບບຈຳລອງ spiroxanthin ຢູ່ທຸກຈຸດຜູກມັດ LH1. alpha ແລະ beta polypeptides ແມ່ນ TMHs ດ່ຽວທີ່ມີພື້ນທີ່ນອກເຍື່ອສັ້ນ (ຮູບທີ 1, A, B, E, ແລະ F). ເຖິງແມ່ນວ່າຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ 17 residues ຢູ່ທີ່ C-terminus ບໍ່ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ, alpha polypeptide ໄດ້ຖືກຕັດອອກຈາກ Met1 ຫາ Ala46 ໃນທັງສອງສະລັບສັບຊ້ອນ. ໂພລີເພບໄທດ໌ β ໄດ້ຫຼຸດລົງຈາກ Gly4 ເປັນ Tyr52 ໃນ RC-LH116, ແລະຈາກ Ser5 ເປັນ Tyr52 ໃນ RC-LH114-W. ບໍ່ພົບຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ 3 ຫຼື 4 N-terminal ຫຼື 13 C-terminal residues (ຮູບ S1). ການວິເຄາະ mass spectrometry ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ປະສົມທີ່ກະກຽມຈາກເຊື້ອພັນ wild-type ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພາກພື້ນທີ່ຂາດຫາຍໄປແມ່ນຜົນມາຈາກການຕັດ heterologous ຂອງ peptides ເຫຼົ່ານີ້ (ຮູບ S1 ແລະ S2). ການສ້າງ formylation N-terminal ຂອງ α-Met1 ຍັງໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ (f). ການວິເຄາະສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ α-peptide ປະກອບດ້ວຍ residues fMet1 ຫາ Asp42/Ala46/Ala47/Ala50, ແລະ β-peptide ປະກອບດ້ວຍ residues Ser2 ຫາ Ala53, ເຊິ່ງສອດຄ່ອງກັບແຜນທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ EM ອຸນຫະພູມຕ່ຳ.
ການປະສານງານຂອງ α-His29 ແລະ β-His36 ເຮັດໃຫ້ BChls ປະເຊີນໜ້າກັນ; ແຕ່ລະ αβ heterodimer ປະກອບກັບເພື່ອນບ້ານເພື່ອສ້າງວົງວຽນເປີດ (RC-LH114-W) ຫຼືວົງວຽນປິດ (RC-LH116) ອ້ອມຮອບ RC The exciton coupled pigment array (ຮູບທີ 1, C ແລະ D). ເມື່ອປຽບທຽບກັບແຖບ 877 nm ຂອງ RC-LH114-W, ການປ່ຽນສີແດງຂອງການດູດຊຶມ 880 nm ຂອງ RC-LH116 ແມ່ນ 3 nm (ຮູບທີ 2A). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ສະເປກຕຣຳ dichroism ວົງມົນແມ່ນເກືອບຄືກັນ (ຮູບທີ 2B), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີຄວາມແຕກຕ່າງຢ່າງຈະແຈ້ງລະຫວ່າງວົງວຽນເປີດ ແລະ ປິດ, ສະພາບແວດລ້ອມທ້ອງຖິ່ນຂອງ BChls ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນຫຼາຍ. ການປ່ຽນສີແດງຂອງການດູດຊຶມອາດເປັນຜົນມາຈາກການເຄື່ອນທີ່ດ້ວຍຄວາມຮ້ອນທີ່ຫຼຸດລົງ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນໃນວົງວຽນປິດ (18, 19), ການປ່ຽນແປງຂອງການເຊື່ອມຕໍ່ຂອງເມັດສີທີ່ເກີດຈາກວົງວຽນປິດ (20, 21), ຫຼື ການລວມກັນຂອງສອງຜົນກະທົບນີ້ (11).
(A) ສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມແສງອັນຕຣາໄວໂອເລັດ/ເບິ່ງເຫັນໄດ້/ໃກ້ອິນຟາເຣດ, ຈຸດສູງສຸດຂອງພວກມັນຖືກໝາຍດ້ວຍເມັດສີທີ່ສອດຄ້ອງກັນ ແລະ ຖືກປັບໃຫ້ເປັນປົກກະຕິເຖິງຈຸດສູງສຸດຂອງ BPh ທີ່ 775 nm. (B) ສະເປກຕຣຳ dichroism ວົງກົມຖືກປັບໃຫ້ເປັນປົກກະຕິເຖິງການດູດຊຶມ BChl ທີ່ 805 nm. (C ແລະ D) ສະເປກຕຣຳ ΔA ທີ່ເລືອກຈາກສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມທີ່ແກ້ໄຂເວລາຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W (C) ແລະສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 (D). ເພື່ອການປຽບທຽບທີ່ດີກວ່າ, ສະເປກຕຣຳທັງໝົດຖືກປັບໃຫ້ເປັນປົກກະຕິເຖິງ ∆A ຂອງ −A ທີ່ 0.2 ps. (E) ອັດຕາການຜຸພັງຂອງ cytochrome c2 ຫຼັງຈາກການສ່ອງແສງໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆຂອງ UQ2 (ເບິ່ງຮູບ S8 ສຳລັບຂໍ້ມູນດິບ). (F) ໃນຈຸລັງທີ່ເຕີບໃຫຍ່ພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງຄວາມເຂັ້ມຕໍ່າ, ກາງ ຫຼື ສູງ (10, 30 ຫຼື 300μMm-2 s-1, ຕາມລຳດັບ), ໂປຣຕີນ W ແລະ RC-L ຍ່ອຍຢູ່ໃນສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ບໍລິສຸດ ແລະ ອັດຕາສ່ວນເຍື່ອຫຸ້ມທີ່ແຍກອອກ. ກຳນົດລະດັບໂປຣຕີນໂດຍການວິເຄາະດ້ວຍ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis ແລະ immunoassay (ເບິ່ງຮູບ S9 ສຳລັບຂໍ້ມູນດິບ). ກຳນົດອັດຕາສ່ວນທຽບກັບສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W ທີ່ບໍລິສຸດ. ອັດຕາສ່ວນ stoichiometric ຂອງ RC-L ຕໍ່ໂປຣຕີນ-W ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນແມ່ນ 1:1.
BChls ຢູ່ທີ່ຕຳແໜ່ງທີ 1 ໃນວົງ αβ14 ທີ່ຜິດຮູບຂອງ RC-LH114-W (ຮູບທີ 1, A, C, ແລະ E) ແມ່ນຢູ່ໃກ້ກັບຜູ້ໃຫ້ RC ຫຼັກ (P) 6.8Å ກ່ວາ BChls ທຽບເທົ່າໃນ RC-LH116 (ຮູບທີ 1, B, D, ແລະ F, ແລະຮູບ S3); ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການເຄື່ອນໄຫວການດູດຊຶມຊົ່ວຄາວຂອງສອງສະລັບສັບຊ້ອນສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສຳລັບ RC-LH114-W ແລະ RC-LH116, ຄ່າຄົງທີ່ເວລາການໂອນພະລັງງານກະຕຸ້ນຈາກ LH1 ຫາ RC ແມ່ນ 40 ±4 ແລະ 44 ±3 ps (ຮູບທີ 2). , C ແລະ D, ຮູບ S4 ແລະຕາຕະລາງ S2). ຍັງບໍ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນໃນການໂອນເອເລັກໂຕຣນິກພາຍໃນ RC (ຮູບ S5 ແລະຂໍ້ຄວາມເສີມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ). ພວກເຮົາສົງໃສວ່າຄວາມສອດຄ່ອງຢ່າງໃກ້ຊິດຂອງເວລາການໂອນພະລັງງານລະຫວ່າງ LH1 ແລະ RC-P ແມ່ນຍ້ອນໄລຍະທາງ, ມຸມ ແລະພະລັງງານທີ່ມີທ່າແຮງທີ່ຄ້າຍຄືກັນຂອງ BChl ສ່ວນໃຫຍ່ໃນສອງວົງ LH1. ເບິ່ງຄືວ່າການສຳຫຼວດຮູບແບບພະລັງງານ LH1 ເພື່ອບັນລຸໄລຍະທາງຕໍ່າສຸດບໍ່ໄດ້ໄວກວ່າການໂອນພະລັງງານໂດຍກົງຈາກສະຖານທີ່ທີ່ບໍ່ດີທີ່ສຸດໄປຫາ RC. ວົງແຫວນ LH1 ແບບເປີດໃນ RC-LH114-W ອາດຈະຜ່ານການເຄື່ອນໄຫວທາງຄວາມຮ້ອນທີ່ບໍ່ສຳຄັນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂອຸນຫະພູມຕໍ່າສຳລັບການວິເຄາະໂຄງສ້າງ, ແລະ ມີຮູບຮ່າງວົງແຫວນ αβ14 ທີ່ຍາວກວ່າຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງຈາກໄລຍະການໃສ່ສີຂອງ βBChls ຢູ່ທີ່ຕຳແໜ່ງຂອງ RC 1.
ສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 ປະກອບດ້ວຍ 32 BChls ແລະ 16 carotenoids, ແລະການຈັດລຽງໂດຍລວມຂອງມັນແມ່ນຄືກັນກັບທີ່ໄດ້ມາຈາກ Thermochromatium (Tch.) pidpidum [Protein Data Bank (PDB) ID 5Y5S] (9), Thiorhodovibrio (Trv.) 970 strain (PDB ID 7C9R) (12) ແລະ ສາຫຼ່າຍສີຂຽວ (Blc.viridis) (PDB ID 6ET5) (10). ຫຼັງຈາກການຈັດລຽງ, ມີພຽງແຕ່ຄວາມແຕກຕ່າງເລັກນ້ອຍໃນຕຳແໜ່ງຂອງ αβ heterodimers ເທົ່ານັ້ນທີ່ສັງເກດເຫັນ, ໂດຍສະເພາະ 1-5, 15, ແລະ 16 (ຮູບ S6). ການມີຢູ່ຂອງໂປຣຕີນ-W ມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ໂຄງສ້າງຂອງ LH1. TMHs ທັງສາມຂອງມັນເຊື່ອມຕໍ່ກັນດ້ວຍວົງແຫວນສັ້ນ, ໂດຍມີ N-terminal ຢູ່ດ້ານ lumen ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ ແລະ C-terminal ຢູ່ດ້ານ cytoplasmic (ຮູບ 1A ແລະ 3, A ຫາ D). ໂປຣຕີນ-W ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນບໍ່ລະລາຍນ້ຳ (ຮູບທີ 3B), ແລະ TMH2 ແລະ TMH3 ພົວພັນກັບ LH1αβ-14 ເພື່ອສ້າງໜ້າຜິວທີ່ຜ່ານເຍື່ອຫຸ້ມເຊລ (ຮູບທີ 3, B ແລະ E ຫາ G). ສ່ວນຕິດຕໍ່ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນປະກອບດ້ວຍສານຕົກຄ້າງ Phe, Leu ແລະ Val ໃນພາກພື້ນທີ່ຜ່ານເຍື່ອຫຸ້ມເຊລ. ສານຕົກຄ້າງເຫຼົ່ານີ້ຖືກວາງຊ້ອນກັນດ້ວຍກົດອະມິໂນທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳ ແລະ ເມັດສີ αβ-14. ສານຕົກຄ້າງທີ່ມີຂົ້ວບາງຊະນິດຍັງປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການພົວພັນ, ລວມທັງພັນທະໄຮໂດຣເຈນລະຫວ່າງ W-Thr68 ແລະ β-Trp42 ເທິງໜ້າຜິວຂອງຊ່ອງທີ່ສັບສົນ (ຮູບທີ 3, F ແລະ G). ເທິງໜ້າຜິວຂອງໄຊໂຕພລາຊຶມ, Gln34 ຢູ່ຕິດກັບກຸ່ມຄີໂຕຂອງແຄໂຣທີນອຍ αβ-14. ນອກຈາກນັ້ນ, ໂມເລກຸນ n-dodecyl β-d-maltoside (β-DDM) ໄດ້ຖືກລະລາຍ, ແລະຫາງທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳຂອງມັນຂະຫຍາຍໄປຫາໜ້າຜິວລະຫວ່າງໂປຣຕີນ-W ແລະ αβ-14, ແລະຫາງໄຂມັນອາດຈະຕັ້ງຢູ່ໃນຮ່າງກາຍ. ພວກເຮົາຍັງໄດ້ສັງເກດເຫັນວ່າພາກພື້ນທີ່ມີຄວາມລະອຽດຂອງ C-terminal ຂອງໂປຣຕີນ W ແລະ RCH ແມ່ນໃກ້ຄຽງກັນຫຼາຍ, ແຕ່ບໍ່ຢູ່ໃນຂອບເຂດຂອງການສ້າງປະຕິກິລິຍາສະເພາະ (ຮູບທີ 1, A ແລະ E). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ອາດຈະມີປະຕິກິລິຍາໃນກົດອະມິໂນ C-terminal ທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂຂອງໂປຣຕີນສອງຊະນິດນີ້, ເຊິ່ງອາດຈະເປັນກົນໄກສຳລັບການຮັບສະໝັກໂປຣຕີນ-W ໃນລະຫວ່າງການປະກອບຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W.
(ກ) ໂປຣຕີນ-W, ເຊິ່ງຫັນໜ້າເຂົ້າຫາກັບ LH1αβ14 ໃນຮູບແບບກາຕູນ, ມີຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຮູບຊົງຄ້າຍກ້ານ (ສີແດງ), ສະແດງຢູ່ໃນສ່ວນໜຶ່ງຂອງແຜນວາດທ່າແຮງໄຟຟ້າສະຖິດ (ພື້ນຜິວສີເທົາໂປ່ງໃສທີ່ມີລະດັບຮູບຮ່າງ 0.13). (ຂ) ໂປຣຕີນ-W ສະແດງໂດຍພື້ນຜິວທີ່ມີສີທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳ. ພື້ນທີ່ທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ພື້ນທີ່ທີ່ມີປະຈຸໄຟຟ້າສະແດງເປັນສີຟ້າອ່ອນ, ພື້ນທີ່ທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳສະແດງເປັນສີຂາວ, ແລະ ພື້ນທີ່ທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳແຮງສະແດງເປັນສີສົ້ມ. (ຄ ແລະ ງ) ໂປຣຕີນ-W ສະແດງໃນກາຕູນ, ທິດທາງຂອງມັນແມ່ນຄືກັນກັບໃນ (ກ) (ຄ), ແລະ ໝຸນໄດ້ 180° (ງ). ອີງຕາມຕຳແໜ່ງໃນລຳດັບ, ສານຕົກຄ້າງທີ່ສາມາດແຍກແຍະໄດ້ໃຊ້ໂຄງສີຮຸ້ງ, ບ່ອນທີ່ປາຍ N ເປັນສີຟ້າ ແລະ ປາຍ C ເປັນສີແດງ. (ຈ) ໂປຣຕີນ-W ໃນມຸມມອງດຽວກັນກັບໃນ (ກ), ແລະ ສານຕົກຄ້າງຢູ່ທີ່ພື້ນຜິວຂອງໂປຣຕີນ-W:LH1 ສະແດງດ້ວຍກ້ານທີ່ມີເຄື່ອງໝາຍຕິດຢູ່. (F) ໂປຣຕີນ-W ຖືກໝຸນ 90° ທຽບກັບ (E) ແລະ LH1αβ14 ໃນຮູບກາຕູນ, ແລະ ທຽບກັບສ່ວນທີ່ຕິດກັນໃນຮູບແຖບ. ສ່ວນທີ່ຫ້ອຍຢູ່ຈາກເບຕ້າໂພລີເພບໄທດ໌ຖືກຕິດສະຫຼາກ. ຕົວຮ່ວມສະແດງເປັນແຖບທີ່ກົງກັບສີຂອງຮູບທີ 1, β-DDM ທີ່ຍ່ອຍສະຫຼາຍແລ້ວສະແດງເປັນສີເທົາ, ແລະ ອົກຊີເຈນສະແດງເປັນສີແດງ. (G) ມຸມມອງໃນ (F) ຖືກໝຸນ 180°, ໂດຍມີສ່ວນທີ່ໂດດເດັ່ນຂອງອັລຟາໂພລີເພບໄທດ໌ທີ່ຖືກຕິດສະຫຼາກ.
ໂປຣຕີນ-W ທົດແທນ heterodimer αβ (ອັນທີ 15 ໃນຮູບທີ 1F), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປ້ອງກັນການປິດວົງແຫວນ ແລະ ການອຽງຂອງ heterodimer αβ ສາມອັນທຳອິດ. ມີການສັງເກດເຫັນວ່າມຸມອຽງສູງສຸດຂອງ heterodimer αβ-1 ອັນທຳອິດທຽບກັບຟິມປົກກະຕິແມ່ນ 25° ຫາ 29° (ຮູບທີ 1, A ແລະ E), ເຊິ່ງຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍຄວາມອຽງ 2° ຫາ 8° ຂອງ αβ-1 ໃນ RC A ທີ່ມີຄວາມຄົມຊັດສູງ-LH116 (ຮູບທີ 1, B ແລະ F). heterodimer ທີສອງ ແລະ ທີສາມມີຄວາມອຽງຢູ່ທີ່ 12° ຫາ 22° ແລະ 5° ຫາ 10° ຕາມລຳດັບ. ເນື່ອງຈາກການຂັດຂວາງ steric ຂອງ RC, ຄວາມອຽງຂອງ αβ-1 ບໍ່ລວມເອົາຄູ່ທີສອງຂອງ αβ (ເຊິ່ງສອດຄ່ອງກັບ αβ ອັນທີ 16 ໃນຮູບທີ 1F), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສ້າງຊ່ອງຫວ່າງທີ່ຊັດເຈນໃນວົງແຫວນ LH1 (ຮູບທີ 1, A ແລະ E). ເນື່ອງຈາກການຂາດ heterodimers αβ ສອງອັນ, ພ້ອມກັບການສູນເສຍ BChl ສີ່ອັນ ແລະ carotenoids ສອງອັນ, ບໍ່ມີ carotenoids ໃດຜູກມັດກັບໜ່ວຍຍ່ອຍ αβ-1 ທີ່ບິດເບືອນ, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ວົງແຫວນ LH114-W ປະກອບດ້ວຍ carotenoids Vegetarian 13 ອັນ ແລະ BChls 28 ອັນ. ການປະເມີນຄວາມລະອຽດໃນທ້ອງຖິ່ນຂອງສອງສະລັບສັບຊ້ອນໃນພາກພື້ນ αβ1 ຫາ 7 ແມ່ນຕໍ່າກວ່າສ່ວນທີ່ເຫຼືອຂອງວົງ LH1, ເຊິ່ງອາດຈະສະທ້ອນເຖິງຄວາມຍືດຫຍຸ່ນໂດຍທຳມະຊາດຂອງໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ທີ່ຢູ່ຕິດກັບສະຖານທີ່ RC QB (ຮູບທີ 4).
ຮູບພາບຂອງ RC-LH114-W (A ແລະ B) ແລະ RC-LH116 (C ແລະ D) ແມ່ນສະແດງຈາກມຸມມອງດ້ານເທິງ/ມຸມມອງຂ້າງ (A ແລະ B) (A ແລະ C) ແລະ ໜ້າຜິວຂອງຊ່ອງດຽວກັນຂອງຮູບທີ 1. (B ແລະ D). ປຸ່ມສີແມ່ນສະແດງຢູ່ເບື້ອງຂວາ.
ສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກທີ່ມີລັກສະນະພິເສດອີກອັນໜຶ່ງທີ່ມີອັດຕາສ່ວນ stoichiometric 1:14 ແມ່ນ Rhodococcus sphaeroides (Rba.) RC-LH1-PufX dimer (13). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໂປຣຕີນ W ແລະ PufX ບໍ່ມີຄວາມຄ້າຍຄືກັນທີ່ຊັດເຈນ, ແລະມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ໂຄງສ້າງ LH1 ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ. PufX ແມ່ນ TMH ດຽວທີ່ມີໂດເມນ cytoplasmic N-terminal ທີ່ພົວພັນກັບດ້ານ cytoplasmic ຂອງຫນ່ວຍຍ່ອຍ RC-H (13) ຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງທີ່ສອດຄ້ອງກັບ Rps. palustris LH116αβ-16. PufX ສ້າງຊ່ອງທາງສໍາລັບການແລກປ່ຽນ quinone/quinolone ລະຫວ່າງ RC-LH1 ແລະສະລັບສັບຊ້ອນ cytochrome bcl ແລະມີຢູ່ໃນສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ Rba. sphaeroides ທັງໝົດ (13). ເຖິງແມ່ນວ່າການໂຕ້ຕອບ monomer-monomer ຢູ່ໃນ Rba. ໄດເມີ sphaeroides RC-LH1-PufX ຕັ້ງຢູ່ທີ່ຕຳແໜ່ງຜູກມັດຂອງໂປຣຕີນ W ໃນ RC-LH114-W, ແລະຊ່ອງຫວ່າງທີ່ເກີດຈາກ PufX ແລະໂປຣຕີນ-W ແມ່ນຢູ່ທີ່ຕຳແໜ່ງທີ່ເທົ່າທຽມກັນ (ຮູບ S7A). ຊ່ອງຫວ່າງໃນ RC-LH114-W ຍັງສອດຄ່ອງກັບຊ່ອງທາງ quinone ສົມມຸດຕິຖານ (8) ຂອງ Pseudomonas rosea LH1, ເຊິ່ງຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍ peptides ທີ່ບໍ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບໂປຣຕີນ W ຫຼື PufX (ຮູບ S7B). ນອກຈາກນັ້ນ, ຊ່ອງທາງ quinone ໃນ Blc. LH1 ສີຂຽວມໍລະກົດທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍການຍົກເວັ້ນໜ່ວຍຍ່ອຍ γ ໜຶ່ງໜ່ວຍ (7) ແມ່ນຕັ້ງຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງທີ່ຄ້າຍຄືກັນ (ຮູບ S7C). ເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີໂປຣຕີນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການປະກົດຕົວຂອງຊ່ອງທາງ quinone/quinolol ເຫຼົ່ານີ້ຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງຮ່ວມກັນໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ເບິ່ງຄືວ່າເປັນຕົວຢ່າງຂອງວິວັດທະນາການທີ່ລວມເຂົ້າກັນ, ຊີ້ບອກວ່າຊ່ອງຫວ່າງທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍໂປຣຕີນ W ອາດຈະເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຊ່ອງທາງ quinone.
ຊ່ອງຫວ່າງໃນວົງ LH114-W ຊ່ວຍໃຫ້ສາມາດສ້າງພື້ນທີ່ເຍື່ອຫຸ້ມຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງລະຫວ່າງພື້ນທີ່ພາຍໃນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W ແລະເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງ (ຮູບທີ 1G), ແທນທີ່ຈະເຊື່ອມຕໍ່ສອງໂດເມນຜ່ານຮູໂປຣຕີນຄືກັບໃນໂປຣຕີນ. ສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 ແມ່ນຄ້າຍຄືກັບສະລັບສັບຊ້ອນ Tch. ຄ້າຍຄືເຂັມທີ່ປິດ (22) (ຮູບທີ 1H). ເນື່ອງຈາກການແຜ່ກະຈາຍຂອງ quinone ຜ່ານເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງໄວກວ່າການແຜ່ກະຈາຍຜ່ານຊ່ອງທາງໂປຣຕີນແຄບ, ວົງ LH114-W ທີ່ເປີດສາມາດຊ່ວຍໃຫ້ການປ່ຽນແປງ RC ໄວກວ່າວົງ LH116 ທີ່ປິດ, ແລະການແຜ່ກະຈາຍຂອງ quinone ເຂົ້າໄປໃນ RC ອາດຈະຖືກຈຳກັດຫຼາຍກວ່າ. ເພື່ອທົດສອບວ່າໂປຣຕີນ W ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການປ່ຽນ quinones ຜ່ານ RC ຫຼືບໍ່, ພວກເຮົາໄດ້ປະຕິບັດການທົດສອບການຜຸພັງ cytochrome ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແນ່ນອນຂອງ ubiquinone 2 (UQ2) (ອະນາລັອກຂອງ UQ10 ທຳມະຊາດທີ່ມີຫາງ isoprene ສັ້ນກວ່າ) (ຮູບທີ 2E). ເຖິງແມ່ນວ່າການມີ chelated quinone ເປັນອຸປະສັກຕໍ່ການກຳນົດທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງຄ່າຄົງທີ່ Michaelis ທີ່ປາກົດ (RC-LH114-W ແລະ RC-LH116 ແມ່ນເໝາະສົມສຳລັບ 0.2±0.1μM ແລະ 0.5±0.2μM ຕາມລຳດັບ), ອັດຕາສູງສຸດຂອງ RC-LH114-W (4.6±0.2 e-RC-1 s-1) ແມ່ນໃຫຍ່ກວ່າ RC-LH116 28±5% (3.6±0.1 e-RC-1 s-1).
ໃນເບື້ອງຕົ້ນພວກເຮົາໄດ້ຄາດຄະເນວ່າໂປຣຕີນ-W ມີຢູ່ໃນປະມານ 10% ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ (16); ໃນທີ່ນີ້, ອັດຕາການຄອບຄອງຂອງຈຸລັງການເຕີບໂຕທີ່ມີແສງສະຫວ່າງໜ້ອຍ, ແສງສະຫວ່າງປານກາງ, ແລະແສງສະຫວ່າງສູງແມ່ນ 15±0.6%, 11±1% ແລະ 0.9±0.5, ຕາມລໍາດັບ % (ຮູບທີ 2F). ການປຽບທຽບປະລິມານຂອງ mass spectrometry ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການເພີ່ມ histidine tag ບໍ່ໄດ້ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມອຸດົມສົມບູນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຂອງໂປຣຕີນ-W ເມື່ອທຽບກັບເຊື້ອພັນແບບທຳມະຊາດ (P = 0.59), ສະນັ້ນລະດັບເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ແມ່ນສິ່ງປະດິດຂອງໂປຣຕີນ-W ທີ່ຖືກດັດແປງ (ຮູບ S10). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການຄອບຄອງທີ່ຕໍ່າຂອງໂປຣຕີນ-W ໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ອາດຈະຊ່ວຍໃຫ້ RC ບາງອັນປ່ຽນໃນອັດຕາທີ່ເລັ່ງຂຶ້ນ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຫຼຸດຜ່ອນການແລກປ່ຽນ quinone/quinolone ທີ່ຊ້າລົງໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116. ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າອັດຕາການຄອບຄອງແສງສະຫວ່າງສູງບໍ່ສອດຄ່ອງກັບຂໍ້ມູນ transcriptomics ທີ່ຜ່ານມາ, ເຊິ່ງຊີ້ບອກວ່າການສະແດງອອກຂອງ gene pufW ເພີ່ມຂຶ້ນພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງທີ່ແຮງ (ຮູບ S11) (23). ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງການຖອດລະຫັດ pufW ແລະ ການລວມເຂົ້າກັບໂປຣຕີນ-W ເຂົ້າໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ແມ່ນສັບສົນ ແລະ ອາດຈະສະທ້ອນເຖິງການຄວບຄຸມທີ່ສັບສົນຂອງໂປຣຕີນ.
ໃນ RC-LH114-W, 6 cardiolipin (CDL), 7 phosphatidylcholine (POPC), 1 phosphatidylglycerol (POPG) ແລະ 29 β-DDM ໂມເລກຸນຖືກຈັດສັນ ແລະ ສ້າງແບບຈຳລອງໃນມັນ 6 CDLs, 24 POPCs, 2 POPGs ແລະ 12 βDDMs. RC-LH116 (ຮູບທີ 5, A ແລະ B). ໃນສອງໂຄງສ້າງນີ້, CDL ເກືອບຈະຕັ້ງຢູ່ດ້ານ cytoplasmic ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ, ໃນຂະນະທີ່ POPC, POPG ແລະ β-DDM ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຕັ້ງຢູ່ດ້ານ luminal. ສອງໂມເລກຸນ lipid ແລະ detergent ໄດ້ຖືກແຍກອອກໃນພາກພື້ນ αβ-1 ຫາ αβ-6 ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W (ຮູບທີ 5A), ແລະຫ້າໄດ້ຖືກແຍກອອກໃນພາກພື້ນທຽບເທົ່າຂອງ RC-LH116 (ຮູບທີ 5B). ໄຂມັນເພີ່ມເຕີມໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ອີກຟາກໜຶ່ງຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນ CDL, ສະສົມລະຫວ່າງ RC ແລະ αβ-7 ຫາ αβ-13 (ຮູບທີ 5, A ແລະ B). ໄຂມັນ ແລະ ສານຊັກລ້າງທີ່ມີໂຄງສ້າງອື່ນໆແມ່ນຕັ້ງຢູ່ນອກວົງແຫວນ LH1, ແລະ ລະບົບຕ່ອງໂສ້ acyl ທີ່ມີໂຄງສ້າງດີຂະຫຍາຍອອກໄປລະຫວ່າງໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1, ເຊິ່ງຖືກກຳນົດເປັນ β-DDM ໃນ RC-LH114-W, ແລະ ຖືກກຳນົດເປັນ β-DDM ໃນ RC ສ່ວນປະສົມຂອງ β-DDM ແລະ POPC-LH116. ຕຳແໜ່ງທີ່ຄ້າຍຄືກັນຂອງໄຂມັນ ແລະ ສານຊັກລ້າງທີ່ມີທາດ chelating ໃນໂຄງສ້າງຂອງພວກເຮົາຊີ້ບອກວ່າພວກມັນເປັນບ່ອນຜູກມັດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບສະລີລະວິທະຍາ (ຮູບ S12A). ຕຳແໜ່ງຂອງໂມເລກຸນທຽບເທົ່າໃນ Tch ຍັງມີຄວາມສອດຄ່ອງທີ່ດີ. Gentle ແລະ Trv. ສາຍພັນ 970 RC-LH1s (ຮູບ S12, B ຫາ E) (9, 12) ແລະ ສານຕົກຄ້າງຂອງພັນທະໄຮໂດເຈນຂອງກຸ່ມຫົວໄຂມັນສະແດງໃຫ້ເຫັນການອະນຸລັກທີ່ດີພໍສົມຄວນໃນການຈັດລຽງລຳດັບ (ຮູບ S13), ຊີ້ບອກວ່າ CDL ທີ່ຜູກມັດກັບ RC (24) ທີ່ຖືກອະນຸລັກໄວ້, ສະຖານທີ່ເຫຼົ່ານີ້ອາດຈະຖືກອະນຸລັກໄວ້ໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1.
(A ແລະ B) ເພບໄທດ RC-LH114-W (A) ແລະ RC-LH116 (B) ຖືກສະແດງດ້ວຍຮູບກາຕູນ, ແລະເມັດສີຖືກສະແດງດ້ວຍຮູບແທ່ງ, ໂດຍໃຊ້ໂຄງສີໃນຮູບທີ 1. ໄຂມັນສະແດງເປັນສີແດງ, ແລະຜົງຊັກຟອກສະແດງເປັນສີເທົາ. UQ ທີ່ຜູກມັດກັບ RC QA ແລະສະຖານທີ່ QB ແມ່ນສີເຫຼືອງ, ໃນຂະນະທີ່ UQ ທີ່ໂດດດ່ຽວແມ່ນສີຟ້າ. (C ແລະ D) ມຸມມອງດຽວກັນກັບ (A) ແລະ (B), ໂດຍທີ່ບໍ່ມີໄຂມັນ. (E ຫາ G) ມຸມມອງຂະຫຍາຍຂອງ Q1(E), Q2(F) ແລະ Q3(G) ຈາກ RC-LH116, ມີຕ່ອງໂສ້ຂ້າງທີ່ມີອິດທິພົນຕໍ່ກັນ. ພັນທະໄຮໂດຣເຈນສະແດງເປັນເສັ້ນປະສີດຳ.
ໃນ RC-LH116, ທັງ RC QA ແລະ QB UQ, ເຊິ່ງມີສ່ວນຮ່ວມໃນການໂອນເອເລັກຕຣອນໃນຂະບວນການແຍກປະຈຸ, ຈະຖືກຍ່ອຍສະຫຼາຍຢູ່ໃນສະຖານທີ່ຜູກມັດຂອງພວກມັນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນ RC-LH114-W, QB quinones ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂ ແລະ ຈະໄດ້ຮັບການປຶກສາຫາລືໃນລາຍລະອຽດຂ້າງລຸ່ມນີ້. ນອກເໜືອໄປຈາກ QA ແລະ QB quinones, ສອງໂມເລກຸນ UQ ທີ່ມີ chelated (ຕັ້ງຢູ່ລະຫວ່າງວົງແຫວນ RC ແລະ LH1) ແມ່ນຖືກຈັດສັນໃນໂຄງສ້າງ RC-LH114-W ຕາມກຸ່ມຫົວທີ່ຖືກແກ້ໄຂໄດ້ດີຂອງພວກມັນ (ຕັ້ງຢູ່ໃນ Q1 ແລະ Q2, ຕາມລຳດັບ). ຮູບທີ 5C). ສອງໜ່ວຍ isoprene ຖືກກຳນົດໃຫ້ກັບ Q1, ແລະແຜນທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນຈະແກ້ໄຂຫາງ isoprene 10 ທັງໝົດຂອງ Q2. ໃນໂຄງສ້າງຂອງ RC-LH116, ສາມໂມເລກຸນ UQ10 ທີ່ມີ chelated (Q1 ຫາ Q3, ຮູບທີ 5D) ໄດ້ຖືກແກ້ໄຂ, ແລະໂມເລກຸນທັງໝົດມີຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ຊັດເຈນຕະຫຼອດຫາງ (ຮູບທີ 5, D ຫາ G). ໃນສອງໂຄງສ້າງ, ຕຳແໜ່ງຂອງກຸ່ມຫົວ quinone ຂອງ Q1 ແລະ Q2 ມີຄວາມສອດຄ່ອງທີ່ດີເລີດ (ຮູບ S12F), ແລະພວກມັນມີປະຕິກິລິຍາກັບ RC ເທົ່ານັ້ນ. Q1 ຕັ້ງຢູ່ທີ່ທາງເຂົ້າຂອງຊ່ອງຫວ່າງ W ຂອງ RC-LH114-W (ຮູບ 1G ແລະ 5, C, D ແລະ E), ແລະ Q2 ຕັ້ງຢູ່ໃກ້ກັບບ່ອນຜູກມັດ QB (ຮູບ 5, C, D) ແລະ F). ສານຕົກຄ້າງ L-Trp143 ແລະ L-Trp269 ທີ່ອະນຸລັກໄວ້ແມ່ນຢູ່ໃກ້ກັບ Q1 ແລະ Q2 ຫຼາຍ ແລະ ສະໜອງປະຕິກິລິຍາ π-stacking ທີ່ມີທ່າແຮງ (ຮູບ 5, E ແລະ F, ແລະ ຮູບ S12). L-Gln88, 3.0 Å ຈາກອົກຊີເຈນທາງໄກຂອງ Q1, ສະໜອງພັນທະໄຮໂດຣເຈນທີ່ເຂັ້ມແຂງ (ຮູບ 5E); ສານຕົກຄ້າງນີ້ຖືກອະນຸລັກໄວ້ໃນ RC ທັງໝົດຍົກເວັ້ນຄວາມສຳພັນທີ່ຫ່າງໄກທີ່ສຸດ (ຮູບ S13). L-Ser91 ຖືກທົດແທນ Thr ຢ່າງອະນຸລັກໃນ RCs ອື່ນໆສ່ວນໃຫຍ່ (ຮູບ S13), ແມ່ນ 3.8 Angstroms ຈາກ methyl oxygen ຂອງ Q1, ແລະອາດຈະໃຫ້ພັນທະໄຮໂດຣເຈນທີ່ອ່ອນແອ (ຮູບ 5E). Q3 ເບິ່ງຄືວ່າບໍ່ມີປະຕິກິລິຍາສະເພາະ, ແຕ່ຕັ້ງຢູ່ໃນພາກພື້ນ hydrophobic ລະຫວ່າງຫນ່ວຍຍ່ອຍ RC-M ແລະຫນ່ວຍຍ່ອຍ LH1-α 5 ຫາ 6 (ຮູບ 5, D ແລະ G). Q1, Q2 ແລະ Q3 ຫຼື quinones chelated ໃກ້ຄຽງກໍ່ໄດ້ຖືກແກ້ໄຂໃນ Tch. Gentle, Trv. Strain 970 ແລະ Blc. ໂຄງສ້າງ iris (9, 10, 12) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງສະຖານທີ່ຜູກມັດ quinone ຊ່ວຍທີ່ຖືກອະນຸລັກໄວ້ໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 (ຮູບ S12G). UQ ທີ່ເນົ່າເປື່ອຍທັງຫ້າໃນ RC-LH116 ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບ 5.8±0.7 ຂອງແຕ່ລະສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ກຳນົດໂດຍໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ (HPLC), ໃນຂະນະທີ່ UQ ທີ່ເນົ່າເປື່ອຍທັງສາມໃນ RC-LH114-W ແມ່ນຕ່ຳກວ່າຄ່າທີ່ວັດແທກໄດ້ຂອງ 6.2±0.3 (ຮູບ S14) ຊີ້ບອກວ່າມີໂມເລກຸນ UQ ທີ່ຍັງບໍ່ໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂໃນໂຄງສ້າງ.
ໂພລີເພບໄທດ໌ L ແລະ M ທີ່ມີຮູບຮ່າງຄ້າຍຄືກັນແຕ່ລະອັນປະກອບດ້ວຍຫ້າ TMHs ແລະປະກອບເປັນ heterodimer ທີ່ລວມ BChl dimer ໜຶ່ງ, ໂມໂນເມີ BChl ສອງ, ໂມໂນເມີ bacteriophage (BPh) ສອງ, ແລະທາດເຫຼັກທີ່ບໍ່ແມ່ນ Heme ໜຶ່ງ ແລະໂມເລກຸນ UQ10 ໜຶ່ງຫຼືສອງໂມເລກຸນ. ຜ່ານການມີພັນທະໄຮໂດຣເຈນຢູ່ໃນກຸ່ມ ketone ສຸດທ້າຍ ແລະ ການສະສົມທີ່ຮູ້ຈັກໃນ Rps, carotenoids ຖືກລວມເຂົ້າໃນ M-subunit, ເຊິ່ງມີຊື່ວ່າ cis-3,4-dehydroorhodopin. Species (25). ໂດເມນເຍື່ອຫຸ້ມນອກຂອງ RC-H ຖືກຍຶດຕິດກັບເຍື່ອຫຸ້ມໂດຍ TMH ດຽວ. ໂຄງສ້າງ RC ໂດຍລວມແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບສາມ subunit RC ຂອງຊະນິດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ (ເຊັ່ນ Rba). sphaeroides (PDB ID: 3I4D). ວົງຈອນມະຫາພາກຂອງ BChl ແລະ BPh, ກະດູກສັນຫຼັງ carotenoid ແລະທາດເຫຼັກທີ່ບໍ່ແມ່ນ heme ຊ້ອນກັນພາຍໃນຂອບເຂດຄວາມລະອຽດຂອງໂຄງສ້າງເຫຼົ່ານີ້, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບກຸ່ມຫົວ UQ10 ຢູ່ບໍລິເວນ QA ແລະ QB quinone ທີ່ RC-LH116 (ຮູບ S15).
ການມີຢູ່ຂອງໂຄງສ້າງ RC ສອງອັນທີ່ມີອັດຕາການຄອບຄອງສະຖານທີ່ QB ທີ່ແຕກຕ່າງກັນສະໜອງໂອກາດໃໝ່ໃນການກວດສອບການປ່ຽນແປງໂຄງສ້າງທີ່ສອດຄ່ອງກັນທີ່ມາພ້ອມກັບການຜູກມັດ quinone QB. ໃນສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116, quinone QB ຕັ້ງຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງ "proximal" ທີ່ຜູກມັດຢ່າງເຕັມທີ່ (26), ແຕ່ການແຍກອອກຈາກ RC-LH114-W ບໍ່ມີ quinone QB. ບໍ່ມີ quinone QB ໃນ RC-LH114-W, ເຊິ່ງເປັນເລື່ອງແປກໃຈເພາະວ່າສະລັບສັບຊ້ອນມີການເຄື່ອນໄຫວ, ຫຼາຍກວ່າສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 ທີ່ມີ quinone QB ທີ່ມີໂຄງສ້າງ. ເຖິງແມ່ນວ່າວົງແຫວນ LH1 ສອງວົງ chelate ປະມານຫົກ quinones, ແຕ່ຫ້າອັນມີໂຄງສ້າງທີ່ແກ້ໄຂໃນວົງແຫວນ RC-LH116 ທີ່ປິດ, ໃນຂະນະທີ່ມີພຽງສາມອັນເທົ່ານັ້ນທີ່ມີໂຄງສ້າງຈຳກັດໃນວົງແຫວນ RC-LH114-W ທີ່ເປີດ. ຄວາມຜິດປົກກະຕິທາງໂຄງສ້າງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນນີ້ອາດຈະສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງການທົດແທນທີ່ໄວຂຶ້ນຂອງສະຖານທີ່ QB RC-LH114-W, ການເຄື່ອນໄຫວ quinone ທີ່ໄວຂຶ້ນໃນສະລັບສັບຊ້ອນ, ແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການຂ້າມວົງແຫວນ LH1. ພວກເຮົາແນະນຳວ່າການຂາດ UQ ໃນສະຖານທີ່ RC QB ຂອງ RC-LH114-W ອາດເປັນຜົນມາຈາກສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ສັບສົນ ແລະ ມີການເຄື່ອນໄຫວຫຼາຍຂຶ້ນ, ແລະ ສະຖານທີ່ QB ຂອງ RC-LH114-W ໄດ້ຖືກແຊ່ແຂງທັນທີໃນການໝູນວຽນ UQ. ຂັ້ນຕອນສະເພາະ (ທາງເຂົ້າໄປຫາສະຖານທີ່ QB ໄດ້ຖືກປິດແລ້ວ) ສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງຮູບແບບຂອງກິດຈະກຳນີ້.
ຖ້າບໍ່ມີ QB, ການໝູນວຽນທີ່ມາພ້ອມຂອງ L-Phe217 ໄປຫາຕຳແໜ່ງທີ່ບໍ່ເຂົ້າກັນກັບການຜູກມັດ UQ10, ເພາະມັນຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປະທະກັນທາງພື້ນທີ່ກັບໜ່ວຍ isoprene ທຳອິດຂອງຫາງ (ຮູບທີ 6A). ນອກຈາກນັ້ນ, ການປ່ຽນແປງໂຄງສ້າງຫຼັກທີ່ຊັດເຈນແມ່ນເຫັນໄດ້ຊັດເຈນ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນ helix de (helix ສັ້ນໃນວົງລະຫວ່າງ TMH D ແລະ E) ບ່ອນທີ່ L-Phe217 ຖືກຍ້າຍໄປທີ່ຊ່ອງຜູກມັດ QB ແລະ ການໝູນຂອງ L-Tyr223 (ຮູບທີ 6A) ເພື່ອທຳລາຍພັນທະໄຮໂດຣເຈນກັບກອບ M-Asp45 ແລະ ປິດທາງເຂົ້າຂອງບ່ອນຜູກມັດ QB (ຮູບທີ 6B). Helix de pivots ຢູ່ທີ່ຖານຂອງມັນ, Cα ຂອງ L-Ser209 ຖືກເລື່ອນໄປ 0.33Å, ໃນຂະນະທີ່ L-Val221Cα ຖືກເລື່ອນໄປ 3.52Å. ບໍ່ມີການປ່ຽນແປງທີ່ສັງເກດເຫັນໄດ້ໃນ TMH D ແລະ E, ເຊິ່ງສາມາດຊ້ອນກັນໄດ້ໃນໂຄງສ້າງທັງສອງ (ຮູບທີ 6A). ເທົ່າທີ່ພວກເຮົາຮູ້, ນີ້ແມ່ນໂຄງສ້າງທຳອິດໃນ RC ທຳມະຊາດທີ່ປິດບໍລິເວນ QB. ການປຽບທຽບກັບໂຄງສ້າງທີ່ສົມບູນ (ຜູກມັດ QB) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າກ່ອນທີ່ quinone ຈະຖືກຫຼຸດລົງ, ຕ້ອງມີການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງເພື່ອເຮັດໃຫ້ມັນເຂົ້າໄປໃນ quinone. L-Phe217 ໝູນວຽນເພື່ອສ້າງປະຕິກິລິຍາ π-stacking ກັບກຸ່ມຫົວ quinone, ແລະ helix ເຄື່ອນຍ້າຍອອກໄປທາງນອກ, ຊ່ວຍໃຫ້ໂຄງກະດູກຂອງ L-Gly222 ແລະລະບົບຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຂອງ L-Tyr223 ສ້າງເຄືອຂ່າຍພັນທະໄຮໂດຣເຈນທີ່ມີໂຄງສ້າງພັນທະໄຮໂດຣເຈນທີ່ໝັ້ນຄົງ (ຮູບທີ 6, A ແລະ C).
(A) ກາຕູນທີ່ຊ້ອນກັນຂອງໂຮໂລແກຣມ (ລະບົບຕ່ອງໂສ້ L, ລະບົບຕ່ອງໂສ້ສີສົ້ມ/ລະບົບຕ່ອງໂສ້ M, ສີມ່ວງເຂັ້ມ) ແລະໂຄງສ້າງ apo (ສີເທົາ), ເຊິ່ງສ່ວນທີ່ເຫຼືອທີ່ສຳຄັນຖືກສະແດງຢູ່ໃນຮູບແບບຂອງຕົວແທນຄ້າຍຄືກ້ານ. UQ10 ຖືກສະແດງດ້ວຍແຖບສີເຫຼືອງ. ເສັ້ນປະຈຸດສະແດງເຖິງພັນທະໄຮໂດຣເຈນທີ່ສ້າງຂຶ້ນໃນໂຄງສ້າງທັງໝົດ. (B ແລະ C) ຕົວແທນພື້ນຜິວຂອງ apolipoprotein ແລະໂຄງສ້າງວົງແຫວນທັງໝົດ, ເນັ້ນໃສ່ອົກຊີເຈນລະບົບຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຂອງ L-Phe217 ເປັນສີຟ້າ ແລະ L-Tyr223 ເປັນສີແດງ, ຕາມລຳດັບ. ໜ່ວຍຍ່ອຍ L ເປັນສີສົ້ມ; ໜ່ວຍຍ່ອຍ M ແລະ H ບໍ່ມີສີ. (D ແລະ E) Apolipoprotein (D) ແລະສະຖານທີ່ RC QB ທັງໝົດ (E) [ລະບາຍສີດ້ວຍ (A) ຕາມລຳດັບ] ແລະ Thermophilus thermophilus PSII (ສີຂຽວ, ສີຟ້າ ມີ quinone ພາດສະຕິກ; PDB ID: 3WU2) ຈັດລຽນ (58).
ໂດຍບໍ່ຄາດຄິດ, ເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີໂຄງສ້າງຫຼາຍຢ່າງຂອງ RC ທີ່ຂາດ QB ໂດຍບໍ່ມີ LH1, ແຕ່ການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງທີ່ສັງເກດເຫັນໃນການສຶກສານີ້ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ຖືກລາຍງານມາກ່ອນ. ສິ່ງເຫຼົ່ານີ້ລວມມີໂຄງສ້າງການສູນເສຍ QB ຈາກ Blc. viridis (PDB ID: 3PRC) (27), Tch. tepidum (PDB ID: 1EYS) (28) ແລະ Rba. sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29), ເຊິ່ງທັງໝົດແມ່ນເກືອບຄືກັນກັບໂຄງສ້າງ QB ໂດຍລວມຂອງພວກມັນ. ການກວດກາຢ່າງໃກ້ຊິດຂອງ 3PRC ໄດ້ເປີດເຜີຍວ່າໂມເລກຸນຜົງຊັກຟອກ LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Oxide) ຈະຜູກມັດຢູ່ທີ່ທາງເຂົ້າຂອງຕຳແໜ່ງ QB, ເຊິ່ງອາດຈະປ້ອງກັນການຈັດລຽງໃໝ່ໃຫ້ເປັນຮູບຮ່າງປິດ. ເຖິງແມ່ນວ່າ LDAO ບໍ່ຍ່ອຍສະຫຼາຍຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງດຽວກັນໃນ 1EYS ຫຼື 1OGV, RC ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນກະກຽມໂດຍໃຊ້ຜົງຊັກຟອກດຽວກັນ ແລະ ດັ່ງນັ້ນອາດຈະຜະລິດຜົນກະທົບດຽວກັນ. ໂຄງສ້າງຜລຶກຂອງ Rba. Sphaeroides RC ທີ່ຖືກລວມເຂົ້າກັບ cytochrome c2 (PDB ID: 1L9B) ເບິ່ງຄືວ່າມີບໍລິເວນ QB ທີ່ປິດ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນກໍລະນີນີ້, ພາກພື້ນ N-terminal ຂອງ polypeptide RC-M (ພົວພັນກັບບໍລິເວນຜູກມັດ QB ຜ່ານພັນທະ H ຂອງສານ Tyr ໃນ helix Q) ຮັບຮອງເອົາຮູບແບບທີ່ຜິດປົກກະຕິ, ແລະການປ່ຽນແປງຮູບແບບ QB ບໍ່ໄດ້ຖືກສຳຫຼວດຕື່ມອີກ (30). ສິ່ງທີ່ໜ້າເຊື່ອຖືແມ່ນວ່າພວກເຮົາຍັງບໍ່ທັນໄດ້ເຫັນການຜິດຮູບແບບນີ້ຂອງ polypeptide M ໃນໂຄງສ້າງ RC-LH114-W, ເຊິ່ງເກືອບຄືກັນກັບພາກພື້ນ N-terminal ຂອງ RC-LH116 RC. ມັນຄວນຈະສັງເກດວ່າຫຼັງຈາກການກຳຈັດສາຍອາກາດ LH1 ທີ່ອີງໃສ່ຜົງຊັກຟອກ, apolipoprotein RCs ໃນ PDB ໄດ້ຖືກແກ້ໄຂ, ເຊິ່ງໄດ້ກຳຈັດສະລອຍນ້ຳ quinone ພາຍໃນ ແລະ lipids ໃນຊ່ອງຫວ່າງລະຫວ່າງ RC ແລະ ໜ້າດິນພາຍໃນຂອງວົງແຫວນ LH1 ອ້ອມຂ້າງ (31, 32). RC ຍັງຄົງເຮັດວຽກໄດ້ເພາະມັນຮັກສາ cofactors ທັງໝົດໄວ້, ຍົກເວັ້ນ quinone QB ທີ່ຍ່ອຍສະຫຼາຍໄດ້, ເຊິ່ງມີຄວາມໝັ້ນຄົງໜ້ອຍກວ່າ ແລະ ມັກຈະສູນເສຍໄປໃນລະຫວ່າງຂະບວນການກະກຽມ (33). ນອກຈາກນັ້ນ, ເປັນທີ່ຮູ້ກັນວ່າການກຳຈັດ LH1 ແລະ lipids ວົງຈອນທຳມະຊາດອອກຈາກ RC ສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ໜ້າທີ່ຕ່າງໆ, ເຊັ່ນ: ອາຍຸການໃຊ້ງານທີ່ສັ້ນລົງຂອງສະຖານະ P+QB ທີ່ແຍກອອກຈາກປະຈຸ (31, 34, 35). ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາຄາດຄະເນວ່າການມີຢູ່ຂອງວົງແຫວນ LH1 ໃນທ້ອງຖິ່ນທີ່ອ້ອມຮອບ RC ອາດຈະຮັກສາສະຖານທີ່ QB ທີ່ "ປິດ", ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຮັກສາສະພາບແວດລ້ອມໃນທ້ອງຖິ່ນໃກ້ກັບ QB.
ເຖິງແມ່ນວ່າ apolipoprotein (ໂດຍບໍ່ມີ QB quinone) ແລະໂຄງສ້າງທີ່ສົມບູນເປັນຕົວແທນພຽງແຕ່ສອງພາບຖ່າຍຂອງການໝູນວຽນຂອງສະຖານທີ່ QB, ແທນທີ່ຈະເປັນຊຸດຂອງເຫດການ, ມີຕົວຊີ້ບອກວ່າການຜູກມັດສາມາດຖືກ gated ເພື່ອປ້ອງກັນການຜູກມັດຄືນໃໝ່ໂດຍ hydroquinone ເພື່ອຍັບຍັ້ງການຍັບຍັ້ງ substrate. ການພົວພັນຂອງ quinolol ແລະ quinone ໃກ້ກັບສະຖານທີ່ QB ຂອງ apolipoprotein ອາດຈະແຕກຕ່າງກັນ, ເຊິ່ງນໍາໄປສູ່ການປະຕິເສດຂອງມັນໂດຍ RC. ມັນໄດ້ຖືກສະເໜີມາດົນແລ້ວວ່າການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງມີບົດບາດໃນການຜູກມັດແລະການຫຼຸດຜ່ອນ quinones. ຄວາມສາມາດຂອງ RCs ແຊ່ແຂງໃນການຫຼຸດຜ່ອນ quinones ຫຼັງຈາກການປັບຕົວທີ່ມືດແມ່ນບົກຜ່ອງ (36); ການຖ່າຍພາບຜລຶກ X-ray ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມເສຍຫາຍນີ້ແມ່ນຍ້ອນ QB quinones ຖືກກັກຂັງຢູ່ໃນຮູບແບບ "distal" ປະມານ 4.5 Å ຈາກຕໍາແຫນ່ງ proximal ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ (26), 37). ພວກເຮົາແນະນໍາວ່າຮູບແບບການຜູກມັດ distal ນີ້ແມ່ນພາບຖ່າຍຂອງສະຖານະກາງລະຫວ່າງ apolipoprotein ແລະໂຄງສ້າງວົງແຫວນເຕັມ, ເຊິ່ງຕິດຕາມການພົວພັນເບື້ອງຕົ້ນກັບ quinone ແລະການເປີດຂອງສະຖານທີ່ QB.
RC ປະເພດ II ທີ່ພົບໃນສະລັບສັບຊ້ອນ PSII ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີໂຟໂຕໂທຣຟິກ ແລະ ໄຊຢາໂນແບັກທີເຣັຍ, ສາຫຼ່າຍ ແລະ ພືດມີການອະນຸລັກໂຄງສ້າງ ແລະ ໜ້າທີ່ (38). ການຈັດລຽງໂຄງສ້າງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 6 (D ແລະ E) ເນັ້ນໜັກເຖິງຄວາມຄ້າຍຄືກັນລະຫວ່າງ PSII RCs ແລະ ສະຖານທີ່ QB ຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ. ການປຽບທຽບນີ້ເປັນຕົວແບບສຳລັບການສຶກສາລະບົບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດຂອງການຜູກມັດ ແລະ ການຫຼຸດຜ່ອນ quinone. ສິ່ງພິມກ່ອນໜ້ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງແມ່ນມາພ້ອມກັບການຫຼຸດຜ່ອນ PSII ຂອງ quinones (39, 40). ດັ່ງນັ້ນ, ໂດຍພິຈາລະນາການອະນຸລັກວິວັດທະນາການຂອງ RC, ກົນໄກການຜູກມັດທີ່ບໍ່ເຄີຍສັງເກດເຫັນມາກ່ອນນີ້ອາດຈະນຳໃຊ້ໄດ້ກັບສະຖານທີ່ QB ຂອງ PSII RC ໃນພືດທີ່ມີໂຟໂຕໂທຣຟິກທີ່ມີອົກຊີເຈນ.
Rps ΔpufW (ການລຶບ pufW ທີ່ບໍ່ມີປ້າຍຊື່) ແລະ PufW-His (C-terminal 10x His-tagged protein-W ທີ່ສະແດງອອກມາຈາກສາຍພັນ pufW locus ທຳມະຊາດ). palustris CGA009 ໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ໃນວຽກງານກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາ (16). ສາຍພັນເຫຼົ່ານີ້ ແລະ ພໍ່ແມ່ປະເພດ isogenic wild-type ໄດ້ຖືກກູ້ຄືນຈາກຕູ້ແຊ່ແຂງໂດຍການສີດຈຸລັງຈຳນວນໜ້ອຍໃສ່ແຜ່ນ PYE (ແຕ່ລະ 5 g ລິດ -1) (ເກັບໄວ້ໃນ LB ທີ່ -80 °C, ປະກອບດ້ວຍໂປຣຕີນ glycerol 50% (w/v)), ສານສະກັດຈາກເຊື້ອລາ ແລະ succinate) agar [1.5% (w/v)]. ແຜ່ນດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກຟັກຄ້າງຄືນໃນຄວາມມືດທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງພາຍໃຕ້ສະພາບ anaerobic, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນສ່ອງແສງດ້ວຍແສງສີຂາວ (~50 μmolm-2 s-1) ທີ່ສະໜອງໃຫ້ໂດຍຫລອດໄຟ halogen OSRAM 116-W (RS Components, UK) ເປັນເວລາ 3 ຫາ 5 ມື້ຈົນກວ່າຈະມີກຸ່ມດຽວປາກົດຂຶ້ນ. ກຸ່ມດຽວໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສັກຢາ M22+ 10 ml (41) ທີ່ເສີມດ້ວຍກົດ casamino 0.1% (w/v) (ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າ M22). ເຊື້ອເຫັດໄດ້ຖືກປູກພາຍໃຕ້ສະພາບອົກຊີເຈນຕໍ່າໃນຄວາມມືດທີ່ອຸນຫະພູມ 34°C ດ້ວຍການສັ່ນທີ່ 180 rpm ເປັນເວລາ 48 ຊົ່ວໂມງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເຊື້ອເຫັດ 70 ml ໄດ້ຖືກສັກຢາພາຍໃຕ້ສະພາບດຽວກັນເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ. ເຊື້ອເຫັດເຄິ່ງແອໂຣບິກທີ່ມີປະລິມານ 1 ml ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສັກຢາ M22 30 ml ໃນຂວດແກ້ວໂປ່ງໃສແບບໝຸນຫົວທີ່ມີມາດຕະຖານ 30 ml ແລະສ່ອງແສງດ້ວຍການສັ່ນ (~50μmolm-2 s-1) ເປັນເວລາ 48 ຊົ່ວໂມງໂດຍໄມ້ຄົນທີ່ມີແຮງແມ່ເຫຼັກທີ່ເປັນຫມັນ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເຊື້ອເຫັດ 30 ml ໄດ້ຖືກສັກຢາດ້ວຍເຊື້ອເຫັດປະມານ 1 ລິດພາຍໃຕ້ສະພາບດຽວກັນ, ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສັກຢາປະມານ 9 ລິດຂອງເຊື້ອເຫັດທີ່ສະຫວ່າງຢູ່ທີ່ ~200 μmolm-2 s-1 ເປັນເວລາ 72 ຊົ່ວໂມງ. ຈຸລັງໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວໂດຍການປั่นແຍກທີ່ 7132 RCF ເປັນເວລາ 30 ນາທີ, ຖືກລະລາຍຄືນໃໝ່ໃນປະມານ 10 ml ຂອງ 20 mM tris-HCl (pH 8.0), ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20°C ຈົນກວ່າຈະຕ້ອງການ.
ຫຼັງຈາກລະລາຍແລ້ວ, ໃຫ້ຕື່ມຜລຶກຂອງ deoxyribonuclease I (Merck, ອັງກິດ), lysozyme (Merck, ອັງກິດ) ແລະຢາເມັດຍັບຍັ້ງ protease Roche holoenzyme ສອງເມັດ (Merck, ອັງກິດ) ໃສ່ຈຸລັງທີ່ຖືກລະລາຍຄືນໃໝ່. ໃນຈຸລັງຄວາມດັນ 20,000 psi ຂອງຝຣັ່ງ (Aminco, ອາເມລິກາ), ຈຸລັງໄດ້ຖືກທຳລາຍ 8 ຫາ 12 ເທື່ອ. ຫຼັງຈາກກຳຈັດຈຸລັງທີ່ບໍ່ແຕກ ແລະ ເສດເຫຼືອທີ່ບໍ່ລະລາຍໂດຍການປั่นແຍກທີ່ 18,500 RCF ເປັນເວລາ 15 ນາທີທີ່ 4°C, ເຍື່ອໄດ້ຖືກຕົກຕະກອນຈາກ lysate ທີ່ມີເມັດສີໂດຍການປั่นແຍກທີ່ 113,000 RCF ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງທີ່ 43,000°C. ຖິ້ມສ່ວນທີ່ລະລາຍ ແລະ ລະລາຍເຍື່ອສີຄືນໃໝ່ໃນ 100 ຫາ 200 ml ຂອງ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ແລະ ປະສົມເຂົ້າກັນຈົນກວ່າຈະບໍ່ມີສານລວມທີ່ເຫັນໄດ້. ເຍື່ອທີ່ລະລາຍໄດ້ຖືກຟັກໃນ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, ສະຫະລັດອາເມລິກາ) ທີ່ມີ 2% (w/v) β-DDM ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງໃນຄວາມມືດທີ່ 4°C ດ້ວຍການຄົນເບົາໆ. ຈາກນັ້ນ, ປັ່ນແຍກທີ່ 70°C ເພື່ອລະລາຍ 150,000 RCF ທີ່ 4°C ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງເພື່ອກຳຈັດສານທີ່ບໍ່ລະລາຍທີ່ເຫຼືອ.
ເຍື່ອລະລາຍຈາກເຊື້ອ ΔpufW ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃສ່ຖັນແລກປ່ຽນໄອອອນ DEAE Sepharose 50 ml ທີ່ມີປະລິມານສາມຖັນ (CV) ຂອງບັຟເຟີຜູກມັດ [20 mM tris-HCl (pH 8.0) ທີ່ມີ 0.03% (w / v) β-DDM]. ລ້າງຖັນດ້ວຍບັຟເຟີຜູກມັດ CV ສອງອັນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນລ້າງຖັນດ້ວຍບັຟເຟີຜູກມັດສອງອັນທີ່ມີ 50 mM NaCl. ສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍຄວາມຊັນເສັ້ນຊື່ 150 ຫາ 300 mM NaCl (ໃນບັຟເຟີຜູກມັດ) ໃນ 1.75 CV, ແລະສະລັບສັບຊ້ອນຜູກມັດທີ່ຍັງເຫຼືອໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍບັຟເຟີຜູກມັດທີ່ມີ 300 mM NaCl ໃນ 0.5 CV. ເກັບກຳສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມລະຫວ່າງ 250 ແລະ 1000 nm, ຮັກສາສ່ວນທີ່ມີອັດຕາການດູດຊຶມ (A880/A280) ຫຼາຍກວ່າ 1 ທີ່ 880 ຫາ 280 nm, ເຈືອຈາງມັນສອງເທື່ອໃນບັຟເຟີຜູກມັດ, ແລະ ໃຊ້ຂັ້ນຕອນດຽວກັນອີກຄັ້ງໃນຖັນ DEAE ໃນການກັ່ນຕອງ. ເຈືອຈາງສ່ວນທີ່ມີອັດຕາສ່ວນ A880/A280 ສູງກວ່າ 1.7 ແລະ ອັດຕາສ່ວນ A880/A805 ສູງກວ່າ 3.0, ປະຕິບັດການແລກປ່ຽນໄອອອນຮອບທີສາມ, ແລະ ຮັກສາສ່ວນທີ່ມີອັດຕາສ່ວນ A880/A280 ສູງກວ່າ 2.2 ແລະ ອັດຕາສ່ວນ A880/A805 ສູງກວ່າ 5.0. ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ບໍລິສຸດບາງສ່ວນໄດ້ຖືກເຂັ້ມຂຸ້ນເຖິງ ~2 ml ໃນຕົວກອງ centrifugal Amicon 100,000 ທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕັດ (MWCO) (Merck, UK), ແລະໂຫຼດໃສ່ຖັນ Superdex 200 16/600 ຂະໜາດ exclusion (GE Healthcare, US) ທີ່ມີບັຟເຟີ NaCl 200 mM, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກ eletted ໃນບັຟເຟີດຽວກັນທີ່ 1.5 CV. ເກັບກຳສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມຂອງສ່ວນການຍົກເວັ້ນຂະໜາດ, ແລະເຂັ້ມຂຸ້ນສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມດ້ວຍອັດຕາສ່ວນ A880/A280 ຫຼາຍກວ່າ 2.4 ແລະອັດຕາສ່ວນ A880/A805 ຫຼາຍກວ່າ 5.8 ຫາ 100 A880, ແລະໃຊ້ທັນທີສຳລັບການກະກຽມຕາຂ່າຍ cryo-TEM ຫຼືການເກັບຮັກສາ ເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -80°C ຈົນກວ່າຈະຕ້ອງການ.
ເຍື່ອລະລາຍຈາກເຊື້ອ PufW-His ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃສ່ຖັນ HisPrep FF Ni-NTA Sepharose 20 ml (20 mM tris-HCl (pH 8.0) ທີ່ມີ 200 mM NaCl ແລະ 0.03% (w/w)) ໃນບັຟເຟີ IMAC (GE Healthcare). v) β-DDM]. ຖັນໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍບັຟເຟີ IMAC CVs ຫ້າອັນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນດ້ວຍບັຟເຟີ IMAC CVs ຫ້າອັນທີ່ມີ histidine 10 mM. ສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກໄດ້ຖືກລ້າງອອກຈາກຖັນດ້ວຍບັຟເຟີ IMAC ຫ້າອັນທີ່ມີ histidine 100 mM. ສ່ວນທີ່ມີສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W ຈະຖືກເຂັ້ມຂຸ້ນເຖິງ ~10 ml ໃນຖັງທີ່ຖືກຄົນພ້ອມກັບຕົວກອງ Amicon 100,000 MWCO (Merck, UK), ເຈືອຈາງ 20 ເທື່ອດ້ວຍບັຟເຟີຜູກມັດ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເພີ່ມເຂົ້າໃນ 25 ml. ໃນຖັນ DEAE Sepharose, CVs ສີ່ອັນທີ່ຜູກມັດກັບບັຟເຟີຖືກນໍາໃຊ້ລ່ວງໜ້າ. ລ້າງຖັນດ້ວຍບັຟເຟີຜູກມັດ CV ສີ່ອັນ, ຈາກນັ້ນລ້າງສະລັບສັບຊ້ອນໃນແປດ CVs ໃນຄວາມຊັນເສັ້ນຊື່ 0 ຫາ 100 mM NaCl (ໃນບັຟເຟີຜູກມັດ), ແລະ CVs ສີ່ອັນທີ່ເຫຼືອທີ່ມີບັຟເຟີຜູກມັດ 100 mM. ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ເຫຼືອທີ່ຖືກລ້າງອອກໃນໂຊດຽມຄລໍໄຣດ໌ລວມກັບອັດຕາສ່ວນ A880/A280 ທີ່ສູງກວ່າ 2.4 ແລະອັດຕາສ່ວນ A880/A805 ທີ່ສູງກວ່າ 4.6 ສ່ວນໄດ້ຖືກເຂັ້ມຂຸ້ນເຖິງ ~2 ml ໃນຕົວກອງ centrifugal Amicon 100,000 MWCO, ແລະເຕັມໄປດ້ວຍ IMAC 1.5 CV ລ່ວງໜ້າ. ບັຟເຟີທີ່ດຸ່ນດ່ຽງ Superdex 200 16/600 ຂະໜາດຖັນຍົກເວັ້ນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນລ້າງອອກໃນບັຟເຟີດຽວກັນໃນໄລຍະ 1.5 CV. ເກັບກຳສະເປັກຕຣຳການດູດຊຶມຂອງສ່ວນການຍົກເວັ້ນຂະໜາດ ແລະ ສຸມສະເປັກຕຣຳການດູດຊຶມດ້ວຍອັດຕາສ່ວນ A880/A280 ຫຼາຍກວ່າ 2.1 ແລະ ອັດຕາສ່ວນ A880/A805 ຫຼາຍກວ່າ 4.6 ຫາ 100 A880, ເຊິ່ງຖືກນໍາໃຊ້ທັນທີສໍາລັບການກະກຽມຕາຂ່າຍ TEM ແຊ່ແຂງ ຫຼື ເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -80°C ຈົນກວ່າຈະຕ້ອງການ.
ຕູ້ແຊ່ແຂງ Leica EM GP ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກະກຽມຕາຂ່າຍ TEM ທີ່ມີອຸນຫະພູມຕໍ່າ. ສານປະສົມດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກເຈືອຈາງໃນບັຟເຟີ IMAC ໃຫ້ມີ A880 ຂອງ 50, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ 5μl ໄດ້ຖືກໂຫຼດໃສ່ຕາໜ່າງທອງແດງເຄືອບດ້ວຍຄາບອນ QUANTIFOIL 1.2/1.3 ທີ່ຖືກປ່ອຍແສງໃໝ່ (Agar Scientific, UK). ບົ່ມຕາຂ່າຍທີ່ອຸນຫະພູມ 20°C ແລະຄວາມຊຸ່ມຊື່ນສໍາພັດ 60% ເປັນເວລາ 30 ວິນາທີ, ຈາກນັ້ນເຊັດໃຫ້ແຫ້ງເປັນເວລາ 3 ວິນາທີ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນດັບມັນໃນອີເທນແຫຼວທີ່ -176°C.
ຂໍ້ມູນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH114-W ໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ໃນ eBIC (ສູນສ້າງພາບຊີວະພາບເອເລັກໂຕຣນິກ) (ແຫຼ່ງແສງສະຫວ່າງເພັດອັງກິດ) ດ້ວຍກ້ອງຈຸລະທັດ Titan Krios, ເຊິ່ງເຮັດວຽກຢູ່ທີ່ແຮງດັນເລັ່ງ 300kV, ມີການຂະຫຍາຍຕາມຕົວເລກ 130,000× ແລະພະລັງງານຂອງ - ເລືອກຊ່ອງຫວ່າງ 20 eV. ເຄື່ອງກວດຈັບຈຸດສູງສຸດ Gatan 968 GIF Quantum ທີ່ມີເຄື່ອງກວດຈັບຈຸດສູງສຸດ K2 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອບັນທຶກຮູບພາບໃນຮູບແບບການນັບເພື່ອເກັບກຳຂໍ້ມູນ. ຂະໜາດພິກເຊວທີ່ຖືກປັບແມ່ນ 1.048Å, ແລະອັດຕາປະລິມານແສງແມ່ນ 3.83 e-Å-2s-1. ເກັບກຳຮູບເງົາໃນ 11 ວິນາທີ ແລະແບ່ງອອກເປັນ 40 ສ່ວນ. ໃຊ້ພື້ນທີ່ເຄືອບຄາບອນເພື່ອປັບໂຟກັສກ້ອງຈຸລະທັດຄືນໃໝ່, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເກັບກຳຮູບເງົາສາມເລື່ອງຕໍ່ຮູ. ໂດຍລວມແລ້ວ, ມີການເກັບກໍາຮູບເງົາທັງໝົດ 3130 ເລື່ອງ, ດ້ວຍຄ່າ defocus ລະຫວ່າງ -1 ແລະ -3μm.
ຂໍ້ມູນສຳລັບສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH116 ໄດ້ຖືກເກັບກຳໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດດຽວກັນຢູ່ຫ້ອງທົດລອງໂຄງສ້າງຊີວະພາບ Asterbury (ມະຫາວິທະຍາໄລ Leeds, ອັງກິດ). ຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກເກັບກຳໃນຮູບແບບການນັບດ້ວຍການຂະຫຍາຍ 130 k, ແລະຂະໜາດພິກເຊວໄດ້ຖືກປັບໃຫ້ຢູ່ທີ່ 1.065 Å ດ້ວຍປະລິມານແສງ 4.6 e-Å-2s-1. ຮູບເງົາໄດ້ຖືກບັນທຶກໃນ 12 ວິນາທີ ແລະແບ່ງອອກເປັນ 48 ສ່ວນ. ໂດຍລວມແລ້ວ, ມີຮູບເງົາທັງໝົດ 3359 ເລື່ອງທີ່ຖືກເກັບກຳ, ໂດຍມີຄ່າ defocus ລະຫວ່າງ -1 ແລະ -3μm.
ການປະມວນຜົນຂໍ້ມູນທັງໝົດແມ່ນປະຕິບັດຢູ່ໃນທໍ່ສົ່ງ Relion 3.0 (42). ໃຊ້ Motioncorr 2 (43) ເພື່ອແກ້ໄຂການເຄື່ອນທີ່ຂອງລຳແສງໂດຍການໃຫ້ນ້ຳໜັກຂອງປະລິມານ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໃຊ້ CTFFIND 4.1 (44) ເພື່ອກຳນົດພາລາມິເຕີ CTF (ໜ້າທີ່ການໂອນຄວາມຄົມຊັດ). ຮູບຖ່າຍຈຸລະພາກທົ່ວໄປຫຼັງຈາກຂັ້ນຕອນການປະມວນຜົນເບື້ອງຕົ້ນເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2. S16. ແມ່ແບບການເລືອກອັດຕະໂນມັດແມ່ນສ້າງຂຶ້ນໂດຍການເລືອກດ້ວຍຕົນເອງປະມານ 250 ພິກເຊວຂອງ 1000 ອະນຸພາກໃນກອບ 250 ພິກເຊວ ແລະ ບໍ່ມີການອ້າງອີງການຈັດປະເພດສອງມິຕິ (2D), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປະຕິເສດການຈັດປະເພດເຫຼົ່ານັ້ນທີ່ຕອບສະໜອງການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງ ຫຼື ບໍ່ມີລັກສະນະທີ່ຮັບຮູ້ໄດ້. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການເລືອກອັດຕະໂນມັດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນຮູບຖ່າຍຈຸລະພາກທັງໝົດ, ແລະ RC-LH114-W ແມ່ນ 849,359 ອະນຸພາກ, ແລະ RC-LH116 ແມ່ນ 476,547 ອະນຸພາກ. ອະນຸພາກທີ່ເລືອກທັງໝົດໄດ້ຜ່ານການຈັດປະເພດ 2D ທີ່ບໍ່ແມ່ນການອ້າງອີງສອງຮອບ, ແລະຫຼັງຈາກແຕ່ລະຄັ້ງ, ອະນຸພາກທີ່ຕອບສະໜອງພື້ນທີ່ຄາບອນ, ການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງ, ບໍ່ມີລັກສະນະທີ່ຊັດເຈນ ຫຼື ອະນຸພາກທີ່ຊ້ອນກັນຢ່າງແຮງຈະຖືກປະຕິເສດ, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ມີ 772,033 (90.9%) ແລະ 359,678 (75.5%). ອະນຸພາກຖືກນຳໃຊ້ສຳລັບການຈັດປະເພດ 3D ຂອງ RC-LH114-W ແລະ RC-LH116 ຕາມລຳດັບ. ຮູບແບບການອ້າງອີງ 3D ເບື້ອງຕົ້ນໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ວິທີການຫຼຸດລົງຂອງຄວາມຊັນແບບ stochastic. ໂດຍໃຊ້ຮູບແບບເບື້ອງຕົ້ນເປັນເອກະສານອ້າງອີງ, ອະນຸພາກທີ່ເລືອກຈະຖືກຈັດປະເພດອອກເປັນສີ່ປະເພດໃນ 3D. ໂດຍໃຊ້ຮູບແບບໃນໝວດໝູ່ນີ້ເປັນເອກະສານອ້າງອີງ, ປະຕິບັດການປັບປຸງ 3D ໃສ່ອະນຸພາກໃນໝວດໝູ່ທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດ, ຈາກນັ້ນໃຊ້ຕົວກອງ low-pass 15Å ເບື້ອງຕົ້ນເພື່ອປົກຄຸມພື້ນທີ່ຕົວລະລາຍ, ເພີ່ມ 6 ພິກເຊວຂອງຂອບອ່ອນ, ແລະປະມວນຜົນພິກເຊວຫຼັງການແກ້ໄຂໜ້າທີ່ການໂອນຍ້າຍ Modulation ຂອງຈຸດສູງສຸດ Gatan K2 ຂອງເຄື່ອງກວດຈັບດ້ານເທິງ. ສຳລັບຊຸດຂໍ້ມູນ RC-LH114-W, ຮູບແບບເບື້ອງຕົ້ນນີ້ໄດ້ຖືກດັດແປງໂດຍການກຳຈັດຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ແຂງແຮງຢູ່ແຄມຂອງໜ້າກາກ (ຕັດການເຊື່ອມຕໍ່ຈາກຄວາມໜາແໜ້ນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກໃນ UCSF Chimera). ຮູບແບບທີ່ໄດ້ຮັບ (ຄວາມລະອຽດຂອງ RC-LH114-W ແລະ RC-LH116 ແມ່ນ 3.91 ແລະ 4.16 Å, ຕາມລຳດັບ) ຖືກນຳໃຊ້ເປັນເອກະສານອ້າງອີງສຳລັບຮອບທີສອງຂອງການຈັດປະເພດ 3D. ອະນຸພາກທີ່ໃຊ້ແມ່ນຖືກຈັດກຸ່ມເຂົ້າໃນຊັ້ນ 3D ເບື້ອງຕົ້ນ ແລະ ບໍ່ມີຄວາມສຳພັນທີ່ເຂັ້ມແຂງກັບບໍລິເວນໃກ້ຄຽງ. ຊ້ອນກັນ ຫຼື ຂາດລັກສະນະໂຄງສ້າງທີ່ຊັດເຈນ. ຫຼັງຈາກຮອບທີສອງຂອງການຈັດປະເພດ 3D, ໝວດໝູ່ທີ່ມີຄວາມລະອຽດສູງສຸດໄດ້ຖືກເລືອກ [ສຳລັບ RC-LH114-W, ໝວດໝູ່ໜຶ່ງແມ່ນ 377,703 ອະນຸພາກ (44.5%), ສຳລັບ RC-LH116, ມີສອງໝວດໝູ່, ລວມທັງໝົດ 260,752 ອະນຸພາກ (54.7%), ບ່ອນທີ່ພວກມັນຄືກັນພຽງແຕ່ເມື່ອຈັດລຽນຫຼັງຈາກການໝຸນເບື້ອງຕົ້ນດ້ວຍຄວາມແຕກຕ່າງເລັກນ້ອຍ]. ອະນຸພາກທີ່ເລືອກໄດ້ຖືກສະກັດຄືນໃໝ່ໃນກ່ອງ 400 ພິກເຊວ ແລະ ປັບປຸງໂດຍການກັ່ນ 3D. ໜ້າກາກຕົວລະລາຍຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ຕົວກອງ low-pass 15Å ເບື້ອງຕົ້ນ, ການຂະຫຍາຍແຜນທີ່ 3 ພິກເຊວ ແລະ ໜ້າກາກອ່ອນ 3 ພິກເຊວ. ໂດຍໃຊ້ການກັ່ນຕອງ CTF ຕໍ່ອະນຸພາກ, ການແກ້ໄຂການເຄື່ອນໄຫວຕໍ່ອະນຸພາກ ແລະ ຮອບທີສອງຂອງການກັ່ນຕອງ CTF ຕໍ່ອະນຸພາກ, ການກັ່ນຕອງ 3D, ການປິດບັງຕົວລະລາຍ ແລະ ການປະມວນຜົນຫຼັງການປຸງແຕ່ງແມ່ນປະຕິບັດຫຼັງຈາກແຕ່ລະຂັ້ນຕອນເພື່ອປັບປຸງໂຄງສ້າງທີ່ໄດ້ຮັບຕື່ມອີກ. ໂດຍໃຊ້ຄ່າຕັດ FSC (ສຳປະສິດສະຫະສຳພັນ Fourier) ທີ່ 0.143, ຄວາມລະອຽດຂອງຮູບແບບສຸດທ້າຍຂອງ RC-LH114-W ແລະ RC-LH116 ແມ່ນ 2.65 ແລະ 2.80Å ຕາມລຳດັບ. ເສັ້ນໂຄ້ງ FSC ຂອງຮູບແບບສຸດທ້າຍແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2. S17.
ລຳດັບໂປຣຕີນທັງໝົດແມ່ນດາວໂຫຼດມາຈາກ UniProtKB: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5); LH1-α (PufA; UniProtID: Q6N9L4); RC-L (PufL; UniProt ID: O83005); RC-M (PufM; UniProt ID: A0A4Z7); RC-H (PuhA; UniProt ID: A0A4Z9); Protein-W (PufW; UniProt ID: Q6N1K3). SWISS-MODEL (45) ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສ້າງແບບຈໍາລອງຄວາມຄ້າຍຄືກັນຂອງ RC, ເຊິ່ງປະກອບດ້ວຍລໍາດັບໂປຣຕີນຂອງ RC-L, RC-M ແລະ RC-H ແລະໂຄງສ້າງຜລຶກຂອງ Rba. sphaeroides RC ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ (PDB ID: 5LSE) (46). ໃຊ້ເຄື່ອງມື "ແຜນທີ່ທີ່ເໝາະສົມ" ໃນ UCSF Chimera ເພື່ອໃຫ້ຮູບແບບທີ່ສ້າງຂຶ້ນເໝາະສົມກັບແຜນທີ່ (47), ປັບປຸງໂຄງສ້າງໂປຣຕີນ, ແລະ cofactor [4×BChl a (ຊື່ສານຕົກຄ້າງຂອງຫ້ອງສະໝຸດໂມໂນເມີ = BCL), 2×BPh a (BPH), ໜຶ່ງ ຫຼື ສອງຊະນິດຂອງ UQ10 (U10), ໜຶ່ງຊະນິດທີ່ບໍ່ແມ່ນ heme iron (Fe) ແລະ ໜຶ່ງຊະນິດ 3,4-dihydrohexacarbonylcholine (QAK)] ໃຊ້ Coot (48) ເພື່ອເພີ່ມ. ເນື່ອງຈາກ QAK ບໍ່ມີຢູ່ໃນຫ້ອງສະໝຸດໂມໂນເມີ, ມັນໄດ້ຖືກກຳນົດພາລາມິເຕີໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງມື eLBOW ໃນ PHENIX (49).
ຕໍ່ໄປ, ໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນ. ໃນເບື້ອງຕົ້ນ, ເຄື່ອງມືການກໍ່ສ້າງອັດຕະໂນມັດໃນ PHENIX (49) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສ້າງສ່ວນໜຶ່ງຂອງລໍາດັບ LH1 ໂດຍອັດຕະໂນມັດໂດຍໃຊ້ແຜນທີ່ ແລະລໍາດັບໂປຣຕີນ LH1-α ແລະ LH1-β ເປັນຂໍ້ມູນປ້ອນເຂົ້າ. ເລືອກໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ທີ່ສົມບູນທີ່ສຸດ, ສະກັດມັນ ແລະ ໂຫຼດມັນເຂົ້າໄປໃນ Coot, ເພີ່ມລໍາດັບທີ່ຂາດຫາຍໄປໃນມັນດ້ວຍຕົນເອງ, ແລະ ປັບປຸງໂຄງສ້າງທັງໝົດດ້ວຍຕົນເອງກ່ອນທີ່ຈະເພີ່ມ BCls a (BCL) ສອງຊະນິດ ແລະ spirilloxanthin (CRT) [ອີງຕາມ Rps ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ LH1 ແລະ ປະລິມານ carotenoid ທີ່ຮູ້ຈັກ. ຊະນິດ (17)]. ຄັດລອກໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ທີ່ສົມບູນ, ແລະ ໃຊ້ "ເຄື່ອງມືແຜນທີ່ Docking" ຂອງ UCSF Chimera ເພື່ອ docking ໃນພື້ນທີ່ທີ່ບໍ່ແມ່ນແບບຈໍາລອງທີ່ຢູ່ຕິດກັນຂອງຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ LH1, ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນປັບປຸງມັນໃນ Coot; ເຮັດຊ້ຳຂະບວນການຈົນກວ່າໜ່ວຍຍ່ອຍ LH1 ທັງໝົດຈະຖືກສ້າງແບບຈໍາລອງ. ສຳລັບໂຄງສ້າງ RC-LH114-W, ໂດຍການສະກັດເອົາຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ບໍ່ໄດ້ຈັດສັນໃນ Coot, ໂປຣຕີນຈະຖືກແບ່ງສ່ວນຈາກອົງປະກອບທີ່ບໍ່ແມ່ນໂປຣຕີນທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນແຜນທີ່ USCF Chimera ແລະເຄື່ອງມື Autobuild ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອສ້າງຮູບແບບເບື້ອງຕົ້ນ, ແລະໜ່ວຍຍ່ອຍທີ່ຍັງເຫຼືອ (ໂປຣຕີນ-W) ການສ້າງແບບຈຳລອງ. ໃນ PHENIX (49). ຕື່ມລຳດັບທີ່ຂາດຫາຍໄປໃສ່ຮູບແບບທີ່ໄດ້ຮັບໃນ Coot (48), ແລະຈາກນັ້ນປັບປຸງໜ່ວຍຍ່ອຍທັງໝົດດ້ວຍຕົນເອງ. ຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ບໍ່ໄດ້ຈັດສັນທີ່ຍັງເຫຼືອເໝາະສົມກັບການລວມກັນຂອງໄຂມັນ (ID ຫ້ອງສະໝຸດໂມໂນເມີ PDB ຂອງ CDL = CDL, POPC = 6PL ແລະ POPG = PGT), β-DDM detergent (LMT) ແລະໂມເລກຸນ UQ10 (U10). ໃຊ້ການເພີ່ມປະສິດທິພາບ PHENIX (49) ແລະການປັບປຸງດ້ວຍຕົນເອງໃນ Coot (48) ເພື່ອເຮັດໃຫ້ຮູບແບບເບື້ອງຕົ້ນສົມບູນແບບຈົນກວ່າສະຖິຕິຮູບແບບ ແລະຄຸນນະພາບທາງສາຍຕາຂອງຄວາມເໝາະສົມບໍ່ສາມາດປັບປຸງໄດ້ຕື່ມອີກ. ສຸດທ້າຍ, ໃຊ້ LocScale (50) ເພື່ອເຮັດໃຫ້ແຜນທີ່ທ້ອງຖິ່ນຄົມຊັດຂຶ້ນ, ແລະຈາກນັ້ນປະຕິບັດຮອບວຽນອື່ນໆຂອງການສ້າງແບບຈຳລອງຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ບໍ່ໄດ້ຈັດສັນ ແລະການປັບປຸງອັດຕະໂນມັດ ແລະຄູ່ມື.
peptides, cofactors ແລະ lipids ແລະ quinones ອື່ນໆທີ່ຢູ່ພາຍໃນຄວາມໜາແໜ້ນຂອງພວກມັນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1 ແລະ 2. S18 ຫາ S23. ຂໍ້ມູນສະຖິຕິຂອງຮູບແບບສຸດທ້າຍແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ S1.
ເວັ້ນເສຍແຕ່ໄດ້ລະບຸໄວ້ເປັນຢ່າງອື່ນ, ສະເປັກຕຣຳການດູດຊຶມ UV/Vis/NIR ໄດ້ຖືກເກັບກຳໃນເຄື່ອງວັດແທກສະເປັກໂຕຣໂຟໂຕມິເຕີ Cary60 (Agilent, ສະຫະລັດອາເມລິກາ) ໃນໄລຍະຫ່າງ 1 nm ຈາກ 250 nm ຫາ 1000 nm ແລະເວລາປະສົມປະສານ 0.1 ວິນາທີ.
ເຈືອຈາງຕົວຢ່າງໃນ cuvette quartz ທີ່ມີເສັ້ນທາງ 2 ມມ ໄປຫາ A880 ຂອງ 1, ແລະເກັບກຳສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມລະຫວ່າງ 400 ແລະ 1000 nm. ສະເປກຕຣຳ dichroic ວົງມົນໄດ້ຖືກເກັບກຳໃນເຄື່ອງ spectropolarimeter Jasco 810 (Jasco, ຍີ່ປຸ່ນ) ໃນໄລຍະຫ່າງ 1 nm ລະຫວ່າງ 400 nm ແລະ 950 nm ໃນອັດຕາການສະແກນ 20 nm min-1.
ຄ່າສຳປະສິດການສູນເສຍໂມລາຖືກກຳນົດໂດຍການເຈືອຈາງສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກໃຫ້ເປັນ A880 ປະມານ 50. ເຈືອຈາງປະລິມານ 10μl ໃນບັຟເຟີຜູກມັດ 990μl ຫຼື ເມທານອນ, ແລະເກັບກຳສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມທັນທີເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການເສື່ອມສະພາບຂອງ BChl. ປະລິມານ BChl ຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງເມທານອນໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍຄ່າສຳປະສິດການສູນເສຍທີ່ 771 nm ຂອງ 54.8 mM-1 cm-1, ແລະຄ່າສຳປະສິດການສູນເສຍໄດ້ຖືກກຳນົດ (51). ຫານຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ BChl ທີ່ວັດແທກໄດ້ດ້ວຍ 32 (RC-LH114-W) ຫຼື 36 (RC-LH116) ເພື່ອກຳນົດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນຫຼັກ, ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກຳນົດສະເປກຕຣຳການດູດຊຶມຂອງຕົວຢ່າງດຽວກັນທີ່ເກັບກຳໃນບັຟເຟີ. ຄ່າສຳປະສິດການສູນເສຍຂະໜານ. ການວັດແທກຊ້ຳສາມຄັ້ງໄດ້ຖືກປະຕິບັດສຳລັບແຕ່ລະຕົວຢ່າງ, ແລະຄ່າການດູດຊຶມສະເລ່ຍຂອງຄ່າສູງສຸດຂອງ BChl Qy ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ສຳລັບການຄິດໄລ່. ຄ່າສຳປະສິດການສູນພັນຂອງ RC-LH114-W ທີ່ວັດແທກໄດ້ທີ່ 878 nm ແມ່ນ 3280±140 mM-1 cm-1, ໃນຂະນະທີ່ຄ່າສຳປະສິດການສູນພັນຂອງ RC-LH116 ທີ່ວັດແທກໄດ້ທີ່ 880 nm ແມ່ນ 3800±30 mM-1 cm-1.
UQ10 ໄດ້ຖືກວັດແທກຕາມວິທີການໃນ (52). ສະຫຼຸບແລ້ວ, HPLC ໄລຍະປີ້ນກັບກັນ (RP-HPLC) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ລະບົບ Agilent 1200 HPLC. ລະລາຍປະມານ 0.02 nmol ຂອງ RC-LH116 ຫຼື RC-LH114-W ໃນ 50μl ຂອງ 50:50 methanol:chloroform ທີ່ມີ 0.02% (w/v) ferric chloride, ແລະສີດ Beckman Coulter Ultrasphere ODS 4.6 mm ທີ່ສົມດຸນແລ້ວ ລະລາຍໃນ 1 ml-1 min-1 ທີ່ 40°C ໃນຕົວລະລາຍ HPLC (80:20 methanol:2-propanol) ໃນຖັນ ×25 cm. ປະຕິບັດການລະລາຍແບບ isocratic ໃນຕົວລະລາຍ HPLC ເພື່ອຕິດຕາມການດູດຊຶມທີ່ 275 nm (UQ10), 450 nm (carotenoids) ແລະ 780 nm (BChl) ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ. ຈຸດສູງສຸດໃນໂຄຣມາໂຕແກຣມ 275 nm ທີ່ 25.5 ນາທີ ໄດ້ຖືກປະສົມປະສານ, ເຊິ່ງບໍ່ມີສານປະກອບອື່ນໆທີ່ສາມາດກວດພົບໄດ້. ພື້ນທີ່ປະສົມປະສານຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຄິດໄລ່ປະລິມານໂມລຂອງ UQ10 ທີ່ສະກັດໂດຍອ້າງອີງໃສ່ເສັ້ນໂຄ້ງການປັບທຽບທີ່ຄິດໄລ່ຈາກການສີດມາດຕະຖານບໍລິສຸດຈາກ 0 ຫາ 5.8 nmol (ຮູບ S14). ແຕ່ລະຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກວິເຄາະໃນສາມຊ້ຳ, ແລະຄວາມຜິດພາດທີ່ລາຍງານສອດຄ່ອງກັບ SD ຂອງຄ່າສະເລ່ຍ.
ສານລະລາຍທີ່ມີສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ທີ່ມີການດູດຊຶມ Qy ສູງສຸດ 0.1 ໄດ້ຖືກກະກຽມດ້ວຍ cytochrome c2 ຫົວໃຈມ້າທີ່ຫຼຸດລົງ 30 μM (Merck, ອັງກິດ) ແລະ 0 ຫາ 50 μMUQ2 (Merck, ອັງກິດ). ຕົວຢ່າງ 1 ມລ ສາມຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກກະກຽມທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ UQ2 ແຕ່ລະຄັ້ງ ແລະ ບົ່ມໄວ້ຄ້າງຄືນໃນຄວາມມືດທີ່ອຸນຫະພູມ 4°C ເພື່ອຮັບປະກັນການປັບຕົວເຂົ້າກັບຄວາມມືດຢ່າງສົມບູນກ່ອນການວັດແທກ. ສານລະລາຍໄດ້ຖືກໂຫຼດເຂົ້າໄປໃນເຄື່ອງວັດແທກສະເປກໂຕຣໂຟໂຕມິເຕີ OLIS RSM1000 ທີ່ມີຕາຂ່າຍແປວໄຟ/ເສັ້ນ 500 300 nm, ທໍ່ເຂົ້າ 1.24 ມມ, ທໍ່ກາງ 0.12 ມມ ແລະ ທໍ່ອອກ 0.6 ມມ. ຕົວກອງຜ່ານຍາວ 600 nm ຖືກວາງໄວ້ທີ່ທາງເຂົ້າຂອງທໍ່ໂຟໂຕຕົວຢ່າງ ແລະ ທໍ່ໂຟໂຕຄູນອ້າງອີງເພື່ອຍົກເວັ້ນແສງກະຕຸ້ນ. ການດູດຊຶມໄດ້ຖືກຕິດຕາມກວດກາທີ່ 550 nm ດ້ວຍເວລາປະສົມປະສານ 0.15 ວິນາທີ. ແສງກະຕຸ້ນຖືກປ່ອຍອອກມາຈາກໄຟ LED 880 nm M880F2 (ໄດໂອດປ່ອຍແສງ) (Thorlabs Ltd., UK) ຜ່ານສາຍໄຟເບີອໍບຕິກທີ່ຄວາມເຂັ້ມ 90% ຜ່ານຕົວຄວບຄຸມ DC2200 (Thorlabs Ltd., UK) ແລະຖືກປ່ອຍອອກໄປຫາແຫຼ່ງກຳເນີດແສງທີ່ມຸມ 90°. ລຳແສງວັດແທກແມ່ນກົງກັນຂ້າມກັບກະຈົກເພື່ອສົ່ງແສງທີ່ບໍ່ໄດ້ຖືກດູດຊຶມໃນເບື້ອງຕົ້ນໂດຍຕົວຢ່າງ. ຕິດຕາມກວດກາການດູດຊຶມ 10 ວິນາທີກ່ອນຄວາມສະຫວ່າງ 50 ວິນາທີ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການດູດຊຶມໄດ້ຖືກຕິດຕາມກວດກາຕື່ມອີກເປັນເວລາ 60 ວິນາທີໃນຄວາມມືດເພື່ອປະເມີນຂອບເຂດທີ່ quinolol ຫຼຸດຜ່ອນ cytochrome c23+ ໂດຍທຳມະຊາດ (ເບິ່ງຮູບ S8 ສຳລັບຂໍ້ມູນດິບ).
ຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກປະມວນຜົນໂດຍການຕັ້ງຄ່າອັດຕາເລີ່ມຕົ້ນເສັ້ນຊື່ພາຍໃນ 0.5 ຫາ 10 ວິນາທີ (ຂຶ້ນກັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ UQ2) ແລະ ຄ່າສະເລ່ຍຂອງອັດຕາຂອງຕົວຢ່າງທັງສາມຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ UQ2 ແຕ່ລະຄັ້ງ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ RC-LH1 ທີ່ຄິດໄລ່ໂດຍສຳປະສິດການສູນພັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປ່ຽນອັດຕາເປັນປະສິດທິພາບການເລັ່ງປະຕິກິລິຍາ, ເຊິ່ງຖືກວາງແຜນໃນ Origin Pro 2019 (OriginLab, ສະຫະລັດອາເມລິກາ), ແລະ ເໝາະສົມກັບຮູບແບບ Michaelis-Menten ເພື່ອກໍານົດຄ່າ Km ແລະ Kcat ທີ່ປາກົດ.
ສຳລັບການວັດແທກການດູດຊຶມຊົ່ວຄາວ, ຕົວຢ່າງ RC-LH1 ໄດ້ຖືກເຈືອຈາງເປັນ ~2μM ໃນບັຟເຟີ IMAC ທີ່ມີໂຊດຽມ ascorbate 50 mM (Merck, ອາເມລິກາ) ແລະ 0.4 mM Terbutin (Merck, ອາເມລິກາ). ກົດ ascorbic ຖືກໃຊ້ເປັນຜູ້ໃຫ້ເອເລັກຕຣອນທີ່ເສຍສະລະ, ແລະ tert-butaclofen ຖືກໃຊ້ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ QB ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຜູ້ໃຫ້ RC ຫຼັກຍັງຄົງຫຼຸດລົງ (ນັ້ນຄື, ບໍ່ຖືກ photooxidized) ຕະຫຼອດຂະບວນການວັດແທກ. ຕົວຢ່າງປະມານ 3 ml ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນເຊວໝູນທີ່ກຳນົດເອງ (ເສັ້ນຜ່າສູນກາງປະມານ 0.1 ແມັດ, 350 RPM) ທີ່ມີຄວາມຍາວເສັ້ນທາງແສງ 2 ມມ ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງໃນເສັ້ນທາງເລເຊີມີເວລາພຽງພໍສຳລັບການປັບຕົວມືດລະຫວ່າງກຳມະຈອນກະຕຸ້ນ. ໃຊ້ກຳມະຈອນເລເຊີ ~100-fs ເພື່ອຂະຫຍາຍລະບົບເລເຊີ Ti: Sapphire (Spectra Physics, ອາເມລິກາ) ເພື່ອກະຕຸ້ນຕົວຢ່າງທີ່ 880 nm ໃນອັດຕາການຊ້ຳຄືນ 1 kHz (20 nJ ສຳລັບ NIR ຫຼື 100 nJ ສຳລັບ Vis). ກ່ອນທີ່ຈະເກັບກຳຂໍ້ມູນ, ໃຫ້ເອົາຕົວຢ່າງໄປວາງໄວ້ໃກ້ແສງກະຕຸ້ນປະມານ 30 ນາທີ. ການວາງໄວ້ຈະເຮັດໃຫ້ QA ບໍ່ເຮັດວຽກ (ອາດຈະເຮັດໃຫ້ QA ຫຼຸດລົງໜຶ່ງຫຼືສອງຄັ້ງ). ແຕ່ກະລຸນາຮັບຊາບວ່າຂະບວນການນີ້ສາມາດປີ້ນກັບຄືນໄດ້ເພາະວ່າຫຼັງຈາກໄລຍະເວລາຍາວນານຂອງການປັບຕົວໃນຄວາມມືດ, RC ຈະຄ່ອຍໆກັບຄືນສູ່ກິດຈະກຳ QA. ເຄື່ອງວັດແທກສະເປກໂຕຣມິເຕີ Helios (Ultrafast Systems, USA) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອວັດແທກສະເປກຕຣຳຊົ່ວຄາວທີ່ມີເວລາຊັກຊ້າ -10 ຫາ 7000 ps. ໃຊ້ຊອບແວ Surface Xplorer (Ultrafast Systems, USA) ເພື່ອແຍກກຸ່ມຊຸດຂໍ້ມູນ, ຈາກນັ້ນລວມເຂົ້າກັນ ແລະ ມາດຕະຖານ. ໃຊ້ຊຸດຊອບແວ CarpetView (Light Conversion Ltd., Lithuania) ເພື່ອໃຊ້ຊຸດຂໍ້ມູນທີ່ລວມເຂົ້າກັນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສະເປກຕຣຳທີ່ແຕກຕ່າງກັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເສື່ອມສະພາບ, ຫຼືໃຊ້ຟັງຊັນທີ່ລວມຕົວຊີ້ກຳລັງຫຼາຍຕົວກັບການຕອບສະໜອງຂອງເຄື່ອງມືເພື່ອໃຫ້ເໝາະສົມກັບວິວັດທະນາການສະເປກຕຣຳຄວາມຍາວຄື່ນດຽວໃນ Origin (OriginLab, USA).
ດັ່ງທີ່ໄດ້ກ່າວມາຂ້າງເທິງ (53), ຟິມສັງເຄາະແສງທີ່ມີສະລັບສັບຊ້ອນ LH1 ຂາດທັງເສົາອາກາດ RC ແລະ LH2 ອຸປະກອນຕໍ່ພ່ວງໄດ້ຖືກກະກຽມ. ເຍື່ອໄດ້ຖືກເຈືອຈາງໃນ 20 mM tris (pH 8.0) ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກໂຫຼດເຂົ້າໄປໃນ cuvette quartz ທີ່ມີເສັ້ນທາງ optical 2 mm. ກຳມະຈອນເລເຊີ 30nJ ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກະຕຸ້ນຕົວຢ່າງທີ່ 540 nm ດ້ວຍເວລາຊັກຊ້າ -10 ຫາ 7000 ps. ປະມວນຜົນຊຸດຂໍ້ມູນຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ສໍາລັບຕົວຢ່າງ Rps. pal.
ເຍື່ອໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ເປັນເມັດໂດຍການປั่นແຍກທີ່ 150,000 RCF ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງທີ່ 4°C, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນການດູດຊຶມຂອງມັນທີ່ 880 nm ໄດ້ຖືກລະລາຍຄືນໃໝ່ໃນ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ແລະ 200 mM NaCl. ລະລາຍເຍື່ອໂດຍການຄົນຊ້າໆໃນ 2% (w/v) β-DDM ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງໃນຄວາມມືດທີ່ 4°C. ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກເຈືອຈາງໃນ 100 mM triethylammonium carbonate (pH 8.0) (TEAB; Merck, UK) ໃຫ້ມີໂປຣຕີນເຂັ້ມຂຸ້ນ 2.5 mg ml-1 (ການວິເຄາະ Bio-Rad). ການປຸງແຕ່ງຕື່ມອີກໄດ້ຖືກປະຕິບັດຈາກວິທີການທີ່ເຜີຍແຜ່ກ່ອນໜ້ານີ້ (54), ເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍການເຈືອຈາງໂປຣຕີນ 50 μg ເຂົ້າໄປໃນ TEAB ທັງໝົດ 50 μl ທີ່ມີ sodium laurate 1% (w/v) (Merck, UK). ຫຼັງຈາກ sonication ເປັນເວລາ 60 ວິນາທີ, ມັນໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງດ້ວຍ 5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (Merck, UK) ທີ່ 37°C ເປັນເວລາ 30 ນາທີ. ສຳລັບ S-alkylation, ບົ່ມຕົວຢ່າງດ້ວຍ 10 mM methyl S-methylthiomethanesulfonate (Merck, UK) ແລະເພີ່ມມັນຈາກສານລະລາຍສະຕັອກ isopropanol 200 mM ເປັນເວລາ 10 ນາທີທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ການຍ່ອຍສະຫຼາຍໂປຣຕີໂອລິຕິກໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍການເພີ່ມ 2 μg trypsin/endoproteinase Lys-C ສ່ວນປະສົມ (Promega UK) ແລະບົ່ມຢູ່ທີ່ 37°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ. ສານເຄມີ laurate ໄດ້ຖືກສະກັດໂດຍການເພີ່ມ 50 μl ethyl acetate ແລະ 10 μl 10% (v/v) LC grade trifluoroacetic acid (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) ແລະ vortexing ເປັນເວລາ 60 ວິນາທີ. ການແຍກໄລຍະໄດ້ຖືກສົ່ງເສີມໂດຍການ centrifugation ທີ່ 15,700 RCF ເປັນເວລາ 5 ນາທີ. ອີງຕາມໂປໂຕຄອນຂອງຜູ້ຜະລິດ, ຖັນໝຸນ C18 (Thermo Fisher Scientific, ອັງກິດ) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອດູດ ແລະ ລະລາຍເກືອອອກຈາກເຟສລຸ່ມທີ່ມີ peptide ຢ່າງລະມັດລະວັງ. ຫຼັງຈາກການອົບແຫ້ງໂດຍການປั่นແຍກດ້ວຍສູນຍາກາດ, ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ TFA 0.5% ແລະ acetonitrile 3%, ແລະ 500 ng ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ chromatography RP nanoflow ພ້ອມກັບ mass spectrometry ໂດຍໃຊ້ພາລາມິເຕີຂອງລະບົບທີ່ລະບຸໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້.
ໃຊ້ MaxQuant v.1.5.3.30 (56) ສຳລັບການລະບຸ ແລະ ການວັດແທກປະລິມານໂປຣຕີນເພື່ອຄົ້ນຫາຖານຂໍ້ມູນ Rps. palustris proteome (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426). ຂໍ້ມູນໂປຣຕີໂອມິກສ໌ຂອງມວນສານໄດ້ຖືກຝາກໄວ້ໃນ ProteomeXchange Alliance ຜ່ານບ່ອນເກັບຂໍ້ມູນຄູ່ຮ່ວມງານ PRIDE (http://proteomecentral.proteomexchange.org) ພາຍໃຕ້ຕົວລະບຸຊຸດຂໍ້ມູນ PXD020402.
ສຳລັບການວິເຄາະໂດຍ RPLC ພ້ອມກັບການວິເຄາະດ້ວຍ electrospray mass spectrometry, ສະລັບສັບຊ້ອນ RC-LH1 ໄດ້ຖືກກະກຽມຈາກ wild-type Rps. ໂດຍການໃຊ້ວິທີການທີ່ເຜີຍແຜ່ກ່ອນໜ້ານີ້ (16), ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໂປຣຕີນທີ່ຜະລິດຢູ່ໃນຈຸລັງ palustris ແມ່ນ 2 mg ml-1 ໃນ 20 mM Hepes (pH 7.8), 100 mM NaCl ແລະ 0.03% (w/v) β- (ການວິເຄາະ Bio-Rad)) DDM. ອີງຕາມໂປໂຕຄອນຂອງຜູ້ຜະລິດ, ໃຫ້ໃຊ້ຊຸດການກັ່ນຕອງ 2D (GE Healthcare, USA) ເພື່ອສະກັດໂປຣຕີນ 10 μg ໂດຍວິທີການຕົກຕະກອນ, ແລະລະລາຍຕະກອນໃນ 20 μl 60% (v / v) formic acid (FA), 20% (v / v) Acetonitrile ແລະ 20% (v/v) ນ້ຳ. ຫ້າໄມໂຄຣລິດໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ RPLC (Dionex RSLC) ພ້ອມກັບການວິເຄາະດ້ວຍ mass spectrometry (Maxis UHR-TOF, Bruker). ໃຊ້ຖັນ MabPac 1.2×100 ມມ (Thermo Fisher Scientific, ອັງກິດ) ສຳລັບການແຍກທີ່ 60°C ແລະ 100μlmin -1, ດ້ວຍຄວາມຜັນຜວນຂອງ 85% (v / v) ຕົວລະລາຍ A [0.1% (v / v) FA ແລະ 0.02% (V/v) ສານລະລາຍນ້ຳ TFA] ກັບ 85%(v/v) ຕົວລະລາຍ B [0.1%(v/v) FA ແລະ 0.02%(v/v) ໃນ 90%(v/v) acetonitrile TFA] ໂດຍໃຊ້ແຫຼ່ງໄອອອນໄນເຊຊັນແບບເອເລັກໂຕຣສະເປຣມາດຕະຖານ ແລະ ພາລາມິເຕີເລີ່ມຕົ້ນເປັນເວລາຫຼາຍກວ່າ 60 ນາທີ, ເຄື່ອງວັດແທກມວນສານໄດ້ຮັບ 100 ຫາ 2750 m/z (ອັດຕາສ່ວນມວນສານຕໍ່ການສາກໄຟ). ດ້ວຍຄວາມຊ່ວຍເຫຼືອຂອງເຄື່ອງມື FindPept ພອດທອລຊັບພະຍາກອນຊີວະພາບ ExPASy (https://web.expasy.org/findpept/), ສ້າງແຜນທີ່ມວນສານກັບໜ່ວຍຍ່ອຍຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ.
ຈຸລັງໄດ້ຖືກປູກເປັນເວລາ 72 ຊົ່ວໂມງພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງ 100 ml NF-low (10μMm-2 s-1), ປານກາງ (30μMm-2 s-1) ຫຼື ສູງ (300μMm-2 s-1). ສື່ກາງ M22 (ສື່ກາງ M22 ທີ່ບໍ່ໄດ້ໃຊ້ແອມໂມນຽມຊັນເຟດ ແລະ ໂຊດຽມຊັກຊີເນດຖືກທົດແທນດ້ວຍໂຊດຽມອາຊີເຕດ) ໃນຂວດປິດສະກູ 100 ml (23). ໃນຫ້າຮອບ 30 ວິນາທີ, ລູກປັດແກ້ວ 0.1 ໄມຄຣອນໄດ້ຖືກລູກປັດໃນອັດຕາສ່ວນປະລິມານ 1:1 ເພື່ອລະລາຍຈຸລັງ ແລະ ເຮັດໃຫ້ເຢັນໃນນ້ຳກ້ອນເປັນເວລາ 5 ນາທີ. ສານທີ່ບໍ່ລະລາຍ, ຈຸລັງທີ່ບໍ່ແຕກ ແລະ ລູກປັດແກ້ວໄດ້ຖືກກຳຈັດອອກໂດຍການປั่นແຍກທີ່ 16,000 RCF ເປັນເວລາ 10 ນາທີໃນເຄື່ອງປั่นແຍກຂະໜາດນ້ອຍແບບຕັ້ງໂຕະ. ເຍື່ອຫຸ້ມໄດ້ຖືກແຍກອອກໃນ rotor Ti 70.1 ທີ່ມີ 100,000 RCF ໃນ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ດ້ວຍຄວາມຜັນຜວນຂອງນ້ຳຕານຊູໂຄຣສ 40/15% (w/w) ເປັນເວລາ 10 ຊົ່ວໂມງ.
ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນວຽກງານທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, ການກວດຈັບພູມຕ້ານທານຂອງ His tag ໃນ PufW (16). ສະຫຼຸບແລ້ວ, ສະລັບສັບຊ້ອນແກນບໍລິສຸດ (11.8 nM) ຫຼືເຍື່ອທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນດຽວກັນຂອງ RC (ຖືກກຳນົດໂດຍການຜຸພັງຫັກຄ່າຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ຫຼຸດລົງ ແລະ ກົງກັບການໂຫຼດໃນເຈວທີ່ຍ້ອມສີ) ໃນບັຟເຟີໂຫຼດ SDS 2x (Merck, UK) ຖືກເຈືອຈາງສອງເທື່ອ. ໂປຣຕີນໄດ້ຖືກແຍກອອກໃນເຈວ bis-tris NuPage 12% ແບບຈຳລອງ (Thermo Fisher Scientific, UK). ເຈວໄດ້ຖືກຍ້ອມສີດ້ວຍ Coomassie Brilliant Blue (Bio-Rad, UK) ເພື່ອໂຫຼດ ແລະ ເບິ່ງໜ່ວຍຍ່ອຍ RC-L. ໂປຣຕີນໃນເຈວທີສອງໄດ້ຖືກໂອນໄປຫາເຍື່ອ polyvinylidene fluoride (PVDF) ທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍ methanol (Thermo Fisher Scientific, UK) ສຳລັບການວິເຄາະພູມຕ້ານທານ. ເຍື່ອ PVDF ໄດ້ຖືກບລັອກໃນ 50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 0.2% (v / v) Tween-20 ແລະ 5% (w / v) ນົມຜົງໄຂມັນຕ່ຳ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ບົ່ມເຊື້ອດ້ວຍພູມຕ້ານທານປະຖົມຕ້ານ His (ໃນເຈືອຈາງບັຟເຟີພູມຕ້ານທານ [50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl ແລະ 0.05% (v/v) Tween-20] ໃນ 1:1000 A190-114A, Bethyl Laboratories, ສະຫະລັດອາເມລິກາ) ເປັນເວລາ 4 ຊົ່ວໂມງ. ຫຼັງຈາກລ້າງ 3 ເທື່ອເປັນເວລາ 5 ນາທີໃນບັຟເຟີພູມຕ້ານທານ, ເຍື່ອຫຸ້ມໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັບພູມຕ້ານທານຂັ້ນສອງຕ້ານໜູ horseradish peroxidase (Sigma-Aldrich, ອັງກິດ) (ເຈືອຈາງ 1:10,000 ໃນບັຟເຟີພູມຕ້ານທານ) ຟັກເພື່ອໃຫ້ສາມາດກວດຫາໄດ້ (5 ນາທີຫຼັງຈາກລ້າງ 3 ເທື່ອໃນບັຟເຟີພູມຕ້ານທານ) ໂດຍໃຊ້ຊັ້ນຮອງ chemiluminescence WESTAR ETA C 2.0 (Cyanagen, ອີຕາລີ) ແລະ Amersham Imager 600 (GE Healthcare, ອັງກິດ).
ໂດຍການແຕ້ມການແຈກຢາຍຄວາມເຂັ້ມຂອງແຕ່ລະເຈວສີ ຫຼື ຊ່ອງວິເຄາະພູມຕ້ານທານ, ການເຊື່ອມໂຍງພື້ນທີ່ພາຍໃຕ້ຈຸດສູງສຸດ ແລະ ການຄິດໄລ່ອັດຕາສ່ວນຄວາມເຂັ້ມຂອງ RC-L (ເຈວສີ) ແລະ ໂປຣຕີນ-W (immunoassay), ໃນ ImageJ (57) ປະມວນຜົນຮູບພາບ. ອັດຕາສ່ວນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກປ່ຽນເປັນອັດຕາສ່ວນໂມລາໂດຍການສົມມຸດວ່າອັດຕາສ່ວນຂອງ RC-L ຕໍ່ໂປຣຕີນ-W ໃນຕົວຢ່າງ RC-LH114-W ທີ່ບໍລິສຸດແມ່ນ 1:1 ແລະ ເຮັດໃຫ້ຊຸດຂໍ້ມູນທັງໝົດເປັນປົກກະຕິຕາມຄວາມເໝາະສົມ.
ສຳລັບເອກະສານເສີມສຳລັບບົດຄວາມນີ້, ກະລຸນາເບິ່ງ http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1
ນີ້ແມ່ນບົດຄວາມທີ່ສາມາດເຂົ້າເຖິງໄດ້ໂດຍບໍ່ເສຍຄ່າ ເຊິ່ງແຈກຢາຍພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງໃບອະນຸຍາດ Creative Commons Attribution. ບົດຄວາມອະນຸຍາດໃຫ້ນຳໃຊ້, ແຈກຢາຍ ແລະ ສຳເນົາໄດ້ຢ່າງບໍ່ຈຳກັດໃນສື່ໃດກໍໄດ້ ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂວ່າຜົນງານຕົ້ນສະບັບໄດ້ຖືກອ້າງອີງຢ່າງຖືກຕ້ອງ.
ໝາຍເຫດ: ພວກເຮົາພຽງແຕ່ຂໍໃຫ້ທ່ານໃຫ້ທີ່ຢູ່ອີເມວຂອງທ່ານເພື່ອໃຫ້ບຸກຄົນທີ່ທ່ານແນະນຳໃຫ້ກັບໜ້າເວັບຮູ້ວ່າທ່ານຕ້ອງການໃຫ້ເຂົາເຈົ້າເຫັນອີເມວ ແລະ ມັນບໍ່ແມ່ນສະແປມ. ພວກເຮົາຈະບໍ່ບັນທຶກທີ່ຢູ່ອີເມວໃດໆ.
ຄຳຖາມນີ້ແມ່ນໃຊ້ເພື່ອທົດສອບວ່າທ່ານເປັນຜູ້ມາຢ້ຽມຊົມຫຼືບໍ່ ແລະ ປ້ອງກັນການສົ່ງສະແປມໂດຍອັດຕະໂນມັດ.
ເດວິດ ເຈ. ເຄ ສະເວນສ໌ເບີຣີ, ປາກ ຊຽນ, ຟີລິບ ເຈ. ແຈັກສັນ, ໄຄທລິນ ເອັມ. ຟາຣີສ໌, ດາຣິອຸສ ເອັມ. ນິວສ໌ວິດສ໌ກີ, ອີລີຊາເບັດ ຊີ. ມາຕິນ, ເດວິດ ເອ. ຟາມເມີ, ລໍນາ ເອ. ມາໂລນ, ເຣເບກາ ເອັຟ. ທອມສັນ, ນີລ ເອ. ແຣນສັນ, ດານຽນ ພີ. ແຄນນິຟ, ມາກ ເຈ. ດິກແມນ, ດິວວີ ໂຮລເທັນ, ຄຣິສຕິນ ເຄີໄມເອີ, ແອນດຣູ ຮິດຊ໌ຄອກ, ຊີ. ນີລ ຮັນເຕີ
ໂຄງສ້າງທີ່ມີຄວາມລະອຽດສູງຂອງສະລັບສັບຊ້ອນກັບດັກແສງ 1 ໃນສູນກາງປະຕິກິລິຍາໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈໃໝ່ກ່ຽວກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງ quinone.
ເດວິດ ເຈ. ເຄ ສະເວນສ໌ເບີຣີ, ປາກ ຊຽນ, ຟີລິບ ເຈ. ແຈັກສັນ, ໄຄທລິນ ເອັມ. ຟາຣີສ໌, ດາຣິອຸສ ເອັມ. ນິວສ໌ວິດສ໌ກີ, ອີລີຊາເບັດ ຊີ. ມາຕິນ, ເດວິດ ເອ. ຟາມເມີ, ລໍນາ ເອ. ມາໂລນ, ເຣເບກາ ເອັຟ. ທອມສັນ, ນີລ ເອ. ແຣນສັນ, ດານຽນ ພີ. ແຄນນິຟ, ມາກ ເຈ. ດິກແມນ, ດິວວີ ໂຮລເທັນ, ຄຣິສຕິນ ເຄີໄມເອີ, ແອນດຣູ ຮິດຊ໌ຄອກ, ຊີ. ນີລ ຮັນເຕີ
ໂຄງສ້າງທີ່ມີຄວາມລະອຽດສູງຂອງສະລັບສັບຊ້ອນກັບດັກແສງ 1 ໃນສູນກາງປະຕິກິລິຍາໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈໃໝ່ກ່ຽວກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງ quinone.
© 2021 ສະມາຄົມອາເມລິກາເພື່ອຄວາມກ້າວໜ້າຂອງວິທະຍາສາດ. ສະຫງວນລິຂະສິດທັງໝົດ. AAAS ເປັນຄູ່ຮ່ວມງານຂອງ HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef ແລະ COUNTER. ScienceAdvances ISSN 2375-2548.